[發(fā)明專利]檢測萊克多巴胺的熒光微球-膠體金雙顯色定性定量免疫層析試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810905486.1
• 申請日: 2018-08-09
• 公開（公告）號: CN109061205B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳媛;賴衛(wèi)華;羅凱;劉文娟;伍燕華
• 申請（專利權(quán)）人: 江西中德生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/532
• 代理公司: 南昌大牛知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36135
• 代理人: 喻莎

本發(fā)明公開了檢測萊克多巴胺的熒光微球?膠體金雙顯色定性定量免疫層析試紙條及其制備方法，在底板上依次地搭接粘貼濾紙、樣本墊、噴涂有熒光微球?萊克多巴胺單克隆抗體復(fù)合物和膠體金?萊克多巴胺單克隆抗體復(fù)合物的玻璃纖維墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述的硝酸纖維素膜上包被有萊克多巴胺偶聯(lián)抗原作為檢測線和包被有抗鼠抗體作為質(zhì)控線。檢測線顯色比質(zhì)控線顯色淺，則樣本中萊克多巴胺含量大于0.5ng/mL，定性判斷為陽性。定性判斷為陽性的試紙條，直接插入熒光讀取儀中，讀取儀將熒光微球顯色體系的熒光信號數(shù)值化，實現(xiàn)定量檢測。本發(fā)明主要用于食品安全檢測中萊克多巴胺的定性與定量檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全中獸藥殘留檢測領(lǐng)域，具體涉及一種可以同時定性并定量檢測樣品中萊克多巴胺的時間分辨熒光微球-膠體金雙顯色定性定量免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術(shù)

萊克多巴胺(Ractopamine，RAC)是一種苯酚胺類β-2腎上腺素受體激動劑，與鹽酸克倫特羅一樣具有促進(jìn)營養(yǎng)再分配和生長的作用，因此被用作新型添加劑促進(jìn)機(jī)體生長。由于萊克多巴胺具有在動物體內(nèi)蓄積殘留的特性，食用萊克多巴胺添加劑飼養(yǎng)的動物會引起人們不同程度的中毒反應(yīng)，具體表現(xiàn)為骨骼肌收縮增加，引起肌肉震顫。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中一些非法使用者將其作為一種生長促進(jìn)劑添加到動物飼料中，增加瘦肉的生長比率。根據(jù)農(nóng)業(yè)部公告第235號，萊克多巴胺為禁用添加劑，因此在食品(肉中)不得檢出。現(xiàn)行檢測標(biāo)準(zhǔn)有GB/T 22286-2008《動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定》，該方法(高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法)對萊克多巴胺的檢出限為0.5μg/kg。

萊克多巴胺國內(nèi)外主要采用GC-MS，LC-MS，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金標(biāo)記免疫層析試紙條等技術(shù)來實現(xiàn)定性和定量檢測。前三種方法均需借助昂貴而復(fù)雜的儀器和設(shè)備來完成檢測，成本高，并且需要高水平的專業(yè)人員來進(jìn)行操作，實驗結(jié)果耗時較長，無法實現(xiàn)現(xiàn)場檢測，因此不適合于商檢、防疫、畜牧生產(chǎn)者對懷疑對象的快速在線檢測和監(jiān)控。

免疫層析技術(shù)是出現(xiàn)于80年代初期的一種獨特的免疫分析方式，它通常以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細(xì)作用使樣品溶液在層析條上泳動，通過抗原抗體結(jié)合的免疫反應(yīng)原理，層析過程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測線)，通過酶反應(yīng)或直接運用可目測的標(biāo)記物(如膠體金)而得到直觀的實驗結(jié)果(如檢測線出現(xiàn)不同顏色的條帶)；而游離標(biāo)記物則越過檢測線，達(dá)到與結(jié)合標(biāo)記物自動分離之目的。免疫層析技術(shù)常見的目測標(biāo)記載體有膠體金、乳膠、膠體硒等，其中運用最成功的標(biāo)記物為膠體金。但是，膠體金免疫層析試紙條存在以下缺陷：

⑴一般試紙條均為通過肉眼觀察結(jié)果進(jìn)行定性分析，無法實現(xiàn)精準(zhǔn)的定量檢測。

⑵不同的材料基質(zhì)效應(yīng)明顯，樣本背景干擾較大，易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

⑶檢測的陽性結(jié)果無法保存，通常超過判斷時間后，結(jié)果不再準(zhǔn)確可靠。

市場為了滿足對樣本進(jìn)行定量檢測的需求，各種基于不同標(biāo)記物的定量檢測試紙條也層出不窮，一般目前的定量檢測試紙條，都是單一的標(biāo)記物標(biāo)記抗體后，通過小型儀器讀取顯色信號值，再通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量檢測。目前基于不同元素標(biāo)記物的熒光免疫層析方法也已經(jīng)出現(xiàn)，并獲得高靈敏度，但是該定量檢測方法也存在以下缺陷：

⑴實際檢測中，陰性結(jié)果所占比率很高，但該方法所有試紙條均需要用儀器讀取，否則不能得到結(jié)果，在做大批量樣本檢測時，耗時較長！

⑵定量檢測中，檢測部門仍然需要一個閾值來區(qū)分陰性和陽性，所以數(shù)據(jù)處理量較大；

⑶單一的熒光微球試紙條靈敏度較高，但在實際應(yīng)用中，較高的靈敏度其檢測線性范圍則較窄，樣本定量濃度范圍并不適合實際中的檢測需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是針對上述現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種靈敏度高、檢測時間短、操作簡便并能同時實現(xiàn)定性和定量檢測萊克多巴胺的熒光微球-膠體金雙顯色定性定量免疫層析試紙條。