[發明專利]一種高效提取干細胞因子的方法

在審

• 申請號: 201810903864.2
• 申請日: 2018-08-09
• 公開（公告）號: CN110818788A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 高飛
• 申請（專利權）人: 蘇州邁斯特細胞生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/475
• 分類號: C07K14/475;C12N5/074
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及到一種細胞提取方法，尤其涉及到一種高效提取干細胞因子的方法。該高效提取干細胞因子的方法使用1毫米長槍頭將人工誘導多能性干細胞吸入接著吹出，反復吹吸后，在顯微鏡下觀察，取大小合適的人工誘導多能性干細胞塊，轉移到預先準備好的含有基底細胞的培養皿中，完成人工誘導多能性干細胞的分割，可以進行傳代。高效提取干細胞因子的方法，需要的細胞培養基較少，能大大降低細胞傳代過程中的成本；通過1毫米長槍頭的吸吹氣對人工誘導多能性干細胞，大大降低了，人工誘導多能性干細胞分割過程的難度，提高了提取干細胞因子的效率。

技術領域

本發明涉及到一種細胞提取方法，尤其涉及到一種高效提取干細胞因子的方法。

背景技術

誘導多能干細胞（induced pluripotent stem cells iPS）是2006年日本京都大學Shinya Yamanaka在世界著名學術雜志《細胞》上率先報道了誘導多能干細胞的研究。他們把Oct3/4,Sox2、c-Myc和Klf4這四種轉錄因子基因克隆入病毒載體，然后引入小鼠成纖維細胞，發現可誘導其發生轉化，產生的iPS細胞在形態、基因和蛋白表達、表觀遺傳修飾狀態、細胞倍增能力、類胚體和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都與胚胎干細胞相似。

iPS干細胞的出現，在干細胞研究領域、表觀遺傳學研究領域以及生物醫學研究領域都引起了強烈的反響，這不僅是因為它在基礎研究方面的重要性，更是因為它為人們帶來的光明的應用前景。

在基礎研究方面，它的出現，已經讓人們對多能性的調控機制有了突破性的新認識。細胞重編程是一個復雜的過程，除了受細胞內因子調控外，還受到細胞外信號通路的調控。對于Oct4、Sox2和Nanog等維持于細胞自我新能力的轉錄因子的研究正在逐漸地展開；利用iPS干細胞作為實驗模型，只操縱幾個因子的表達，這更會大大加速對多能性調控機理的深入研究。

在實際應用方面，iPS干細胞的獲得方法相對簡單和穩定，不需要使用卵細胞或者胚胎。這在技術上和倫理上都比其他方法更有優勢，iPS干細胞的建立進一步拉近了干細胞和臨床疾病治療的距離，iPS干細胞在細胞替代性治療以及發病機理的研究、新藥篩選方面具有巨大的潛在價值。

此外，iPS干細胞在神經系統疾病、心血管疾病等方面的作用也日益呈現，iPS干細胞在體外已成功地被分化為神經元細胞、神經膠質細胞、心血管細胞和原始生殖細胞等。在臨床疾病治療中具有巨大應用介值。

與經典的胚胎干細胞技術和體細胞核移植技術不同，iPS技術不使用胚胎細胞或卵細胞，因此沒有倫理學的問題。利用iPS技術可以用病人自己的體細胞制備專有的干細胞，所以不會有免疫排斥的問題。

本發明涉及的一種高效提取干細胞因子的方法，該方法使用1毫米長槍頭將人工誘導多能性干細胞吸入接著吹出，反復吹吸后，在顯微鏡下觀察，取大小合適的人工誘導多能性干細胞塊，轉移到預先準備好的含有基底細胞的培養皿中，完成人工誘導多能性干細胞的分割，可以進行傳代。高效提取干細胞因子的方法，需要的細胞培養基較少，能大大降低細胞傳代過程中的成本；通過1毫米長槍頭的吸吹氣對人工誘導多能性干細胞，大大降低了，人工誘導多能性干細胞分割過程的難度，提高了人工誘導多能性干細胞分割效率和傳代成功率。

發明內容

1.為了克服背景技術中存在的缺陷，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種高效提取干細胞因子的方法，其特征在于其步驟為：

（1）將人工誘導多能性干細胞放置在直經為8.55厘米的細胞培養皿內培養，使得人工誘導多能性干細胞覆蓋掉細胞培養皿底面積的85%；

（2）將步驟（1）所述細胞培養皿中的培養基吸出，使用1-3毫升磷酸鹽緩沖液（PBS）對細胞培養皿進行清洗，然后將磷酸鹽緩沖液吸出；

（3）向細胞培養皿中加入0.5-1毫升細胞分裂素（CTK）后搖均勻，常溫下靜止30-120秒，在此期間，至少拍打細胞培養皿一次；