[發明專利]一種甲酰胺酚嗪生物殺菌劑的制備方法

有效

• 申請號: 201810902512.5
• 申請日: 2018-08-09
• 公開（公告）號: CN109251947B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 徐福祥
• 申請（專利權）人: 江西珀爾農作物工程有限公司
• 主分類號: C12P17/12
• 分類號: C12P17/12;A01N43/60;A01P3/00;C12R1/38;C12R1/385
• 代理公司: 南昌賢達專利代理事務所(普通合伙) 36136
• 代理人: 金一嫻

本發明提供了一種甲酰胺酚嗪生物殺菌劑的制備方法：首先將活化的綠針假單胞菌和銅綠假單胞菌分別搖瓶培養，得到種子液A和B；然后將種子液A接種至發酵培養基內，發酵培養20h，接入種子液B，同時補加營養液，繼續發酵培養40?50h，得到發酵液；高速離心發酵液，調pH，萃取、濃縮，得粗品；柱層析，分離得到甲酰胺酚嗪生物殺菌劑。本發明提供的培養基以及培養條件非常適合菌株生長，補加的營養液中含有分支酸，兩種菌株混合發酵，發酵液中的甲酰胺酚嗪含量明顯提高，經一系列后處理后，分離得到純度高于99％的產品，產品對植物病原真菌的抑制作用強。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，為生物殺菌劑的制備，具體涉及一種甲酰胺酚嗪生物殺菌劑的制備方法。

背景技術

殺菌劑用于防治由各種病原微生物引起的植物病害的一類農藥，一般指殺真菌劑。

不同的殺菌劑的作用方式也不同。在病菌侵染前施于植物表面起預防保護作用的，稱為保護性殺菌劑即保護劑；在施藥部位能消滅已侵染病菌的，稱為鏟除性殺菌劑；能被植物吸收并在體內傳導至病菌侵染的部位而消滅病菌的，稱為內吸性殺菌劑，許多鏟除劑也是內吸劑，兩者大多有化學治療作用。因此，實際上常簡單地將殺菌劑分成保護性和內吸性兩種作用方式。它們的作用機理，也可大致分為兩類：1、干擾病菌的呼吸過程，抑制能量的產生。2、干擾菌體生命物質如蛋白質、核酸、甾醇等的生物合成。保護性殺菌劑大多為殺菌譜廣而殺菌力較低的產品。內吸性殺菌劑一般殺菌力較強，殺菌譜則較窄，其中有些品種對某種病原菌有專一的選擇毒性。

天然吩嗪化合物具有廣譜的抑制植物病原真菌的作用，可用于農作物病害防治。其作用機制是在細胞內可作為電子載體，傳遞電子到目標細胞，增加了細胞內的超氧化物自由基，干擾細胞的呼吸鏈，使目標細胞中毒死亡。該類化合物具有安全可靠，不污染環境，對人畜毒性小，且不易產生抗藥性的特點。

吩嗪-1-羧酸(PCA)能夠抑制不同的植物病原菌，但是由于PCA中含有一個羧基，故其在酸性環境中的抑菌活性強，在堿性環境中的抑菌活性顯著下降。吩嗪-1-甲酰胺(PCN，即甲酰胺酚嗪)是以酰胺基團取代了PCA中的羧基，故在不同pH條件下的抑菌活性穩定。甲酰胺酚嗪主要是通過生物發酵合成獲得，是熒光假單胞菌、銅綠假單胞菌和綠針假單胞菌等假單胞菌的代謝產物。但現有發酵培養方法制備得到的甲酰胺酚嗪產率低，發酵操作復雜，周期長，整體成本高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種甲酰胺酚嗪生物殺菌劑的制備方法，采用生物發酵合成的方法制備甲酰胺酚嗪，使用混合菌種發酵，調整培養基、發酵條件和發酵液的后處理方法，明顯提高甲酰胺酚嗪的產率和純度，從而提高對植物土傳病害的防治作用，尤其是對植物病原真菌的抑制作用增強。

具體來說，針對現有技術的不足，本發明提供了如下技術方案：

一種甲酰胺酚嗪生物殺菌劑的制備方法，包括以下步驟：

S1.將活化的綠針假單胞菌接種到液體培養基A中，搖瓶培養，得到種子液A；

S2.將活化的銅綠假單胞菌接種到液體培養基B中，搖瓶培養，得到種子液B；

S3.將種子液A接種至發酵培養基內，發酵培養20h，接入種子液B，同時補加營養液，繼續發酵培養40-50h，得到發酵液；

S4.高速離心發酵液，得到離心液，調節離心液pH，加入萃取劑，將萃取液濃縮，得到粗品；

S5.柱層析，分離得到甲酰胺酚嗪生物殺菌劑。

本發明先分別培養綠針假單胞菌和銅綠假單胞菌，得到生長旺盛的菌株，然后混合發酵培養，得到的發酵液中含有高濃度的甲酰胺酚嗪。

優選地，包括至少一種以下技術特征：