[發明專利]一種甲酰胺酚嗪生物殺菌劑的制備方法

有效

• 申請號: 201810902512.5
• 申請日: 2018-08-09
• 公開（公告）號: CN109251947B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 徐福祥
• 申請（專利權）人: 江西珀爾農作物工程有限公司
• 主分類號: C12P17/12
• 分類號: C12P17/12;A01N43/60;A01P3/00;C12R1/38;C12R1/385
• 代理公司: 南昌賢達專利代理事務所(普通合伙) 36136
• 代理人: 金一嫻

1.一種甲酰胺酚嗪生物殺菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將活化的綠針假單胞菌接種到液體培養基A中，搖瓶培養，得到種子液A；

S2.將活化的銅綠假單胞菌接種到液體培養基B中，搖瓶培養，得到種子液B；

S3.將種子液A接種至發酵培養基內，發酵培養20h，接入種子液B，同時補加營養液，繼續發酵培養40-50h，得到發酵液；

S4.高速離心發酵液，得到離心液，調節離心液pH，加入萃取劑，將萃取液濃縮，得到粗品；

S5.柱層析，分離得到甲酰胺酚嗪生物殺菌劑；

所述發酵培養基包括以下重量份的組分：玉米粉2-5份、葡萄糖2-5份、胰蛋白胨3-5份、乙醇1-2份、磷酸二氫鉀0.05-0.1份、硝酸鉀0.1-0.2份、氯化鐵0.1-0.2份和氨基酸0.1-0.2份，水100-120份，pH7.0-8.0；所述氨基酸為苯丙氨酸和/或酪氨酸；

所述液體培養基A包括以下重量份的組分：葡萄糖1-5份、胰蛋白胨1-5份、乙醇0.5-1.5份、丙酮0.5-1份、磷酸二氫鉀0.05-0.15份和氯化鈉0.05-0.1份，水100-120份，pH6.5-7.3；

所述液體培養基B包括以下重量份的組分：蔗糖0.5-3份、葡萄糖0.5-2份、胰蛋白胨2-5份、甘油1.5-2份、磷酸二氫鉀0.05-0.15份、硫酸鎂0.05-0.1份和氯化銨0.1-0.2份，水100-120份，pH6.8-7.5；

步驟S3中補加的營養液為葡萄糖、胰蛋白胨、甘油、分支酸、磷酸二氫鉀和硝酸銨的混合溶液，配制方法為每100重量份水中加入2-3重量份葡萄糖、2-4重量份胰蛋白胨、1-3重量份甘油、0.02-0.1重量份分支酸、0.05-0.1重量份磷酸二氫鉀和0.5-1.5重量份硝酸銨；

步驟S3中補加的營養液體積占發酵培養基體積的20-50％；

步驟S1中搖瓶培養的條件為：25-30℃的搖床中震蕩培養15-20小時，搖床轉速為200-250r/min；

步驟S2中搖瓶培養的條件為：30-35℃的搖床中震蕩培養15-25小時，搖床轉速為150-200r/min；

步驟S3中的種子液A的接種量為2-5％，發酵培養的條件為：25-35℃通氣培養，通氣量v/v·min為1:0.5-1.0，攪拌速度為200-220r/min，種子液B的接種量為3-6％。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，綠針假單胞菌的活化方法為：將該綠針假單胞菌接種到固體培養基中，在27℃下培養20-25h；銅綠假單胞菌的活化方法為：將該銅綠假單胞菌接種到固體培養基中，在30℃下活化生長20-25h；固體培養基的組成為：每1L水中含胰蛋白胨15g、葡萄糖10g、甘油10mL、乙醇10mL、磷酸氫二鉀0.4g、硫酸鎂0.8g、氯化鈉0.5g和瓊脂20g，pH7.0-7.2。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟S4還包括至少一種以下技術特征：

采用酸調節離心液pH至2-4；

萃取劑與離心液的體積比為1.5-2.5:1；

萃取劑選自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸丁酯中的一種。