[發明專利]一種抗心肌肌鈣蛋白抗體修飾并載有miR-21的脂質體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810898620.X
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108815535B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 彭海生;杜智敏;李明慧;劉肖瑩;唐淑坤;唐雪楓;扈丹丹;張長梅;劉云翠
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68;A61K47/69;A61K31/7105;A61P9/10
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種抗心肌肌鈣蛋白抗體修飾并載有miR?21的脂質體及其制備方法和應用。所述的抗心肌肌鈣蛋白抗體修飾并載有miR?21的脂質體是通過由DSPE?PEG修飾的長循環脂質體包載miR?21后，再在表面偶聯抗cTnT蛋白抗體或其片段得到的。本發明通過水合法在脂質體中包載miR?21，并在脂質體表面修飾抗cTnT蛋白抗體，使得該脂質體具有了靶向缺血性心肌、提高心肌梗死大鼠生存期的作用。經體外細胞試驗、體內分布實驗、能量代謝實驗、藥效學評價均證明該脂質體在可以靶向缺血性心肌的同時，也可以使miR?21不被體內核酶降解而順利到達缺血性心肌并在缺血性心肌處蓄積，從而實現對缺血性心肌梗死的治療。

技術領域

本發明涉及一種作為藥物載體使用的脂質體及其制備方法和應用，特別涉及一種載有miR-21以及靶向心臟的作用，能夠實現治療缺血性心肌梗死的脂質體及其制備方法。本發明屬于醫藥技術領域。

背景技術

急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)是內科急危重癥，我國發病率0.2‰～0.6‰，且發病率呈上升趨勢，死亡率也極高，已然成為了談其色變的嚴重社會問題，所以急需快速的治療方案。目前，國內外公認的傳統療法有藥物治療、介入治療及外科治療。然而藥物治療對病變嚴重的心肌缺血效果有限，而介入治療和外科治療又不及時，所以這三種治療均不能根治急性缺血性心臟病。隨著分子生物學理論和技術的發展，特別是在基因載體的構建、靶基因的界定和轉基因技術等方面取得了重要進展，使許多因基因結構或表達異常引起的心血管疾病利用基因治療有望獲得根治。

在小分子非編碼RNA的研究中最令人振奮的發現之一是哺乳動物細胞內小RNA能執行RNA干擾的功能，特異地沉默目標基因，有效調控機體的生理機能。有文章報道miR-21能夠調控心臟的疾病。miR-21對小鼠缺血/再灌注(I/R)而致的心肌損傷有保護作用。心肌梗塞后6-24h，大鼠梗塞心肌區miR-21表達顯著下調。用熱休克或預處理誘導miR-21等小RNA表達，可明顯減少心肌梗塞面積，并進一步證實上調的熱休克蛋白70(HSP70)、內皮誘導性一氧化氮合成酶可能參與了這些miRNAs介導的心肌保護作用。

心肌肌鈣蛋白T(cTnT)和骨骼肌肌鈣蛋白(skeletal troponin,sTn)異構體有各自的編碼基因。編碼心肌的cTnT的基因只在胚胎期在骨骼肌中有短暫表達。因此，cTnT和sTnT兩者在結構和免疫性上有很大差別。更重要的是，cTnT是心肌損傷的唯一標記蛋白，但是在骨骼肌修復中未見表達。缺血患者心肌間質1h，cTnT濃度就高于正常，這種急性缺血性心肌cTnT的特異性表達為我們提供了設計靶向制劑的特異靶點。

PEG修飾的脂質體可以作為良好的載體，載有化合物、多肽和核酸藥物的脂質納米粒可長時間穩定地維持局部藥物濃度，減少藥量，同時又不致引起機體的不良反應，故具有重要的臨床意義。脂質體納米粒通過表面修飾，達到主動靶向分布于心臟的目的；可改變藥物對生物膜的透過性，有利于藥物向細胞內靶向給藥。而且，通過cTnT抗體修飾的脂質體對生物分子miR-21的包裹可提高藥物穩定性、生物滲透性、在靶部位蓄積定位。

本發明根據抗體介導靶向給藥系統設計原理，將miR-21包載入由DSPE-PEG修飾的長循環脂質體后把表面經過抗cTnT抗體偶聯的Anti-cTnTAb-DSPE-PEG磷脂衍生物嵌入到脂質體中，通過靶向效應達到特異性治療急性缺血性心臟病的目的；通過脂質體載體改善循環中核苷酸的穩定性，避免機體微環境變化對miR-21的破壞，提高其生物效應。在前期工作中，我們成功地復制了急性缺血性心臟病動物模型。通過免疫組織化學研究，我們證實了cTnT在缺血心肌組織中高表達，為抗體介導的靶向給藥系統設計提供了可能。

發明內容

本發明的目的在于提供一種載有miR-21以及靶向心臟的作用，能夠實現治療缺血性心肌梗死的脂質體及其制備方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：