[發明專利]一種甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條

在審

• 申請號: 201810898334.3
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN109187975A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 朱富強;王玨
• 申請（專利權）人: 施康培醫療科技（武漢）有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 楊立;李航

1.一種甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條，包括底板(8)和依次設在所述底板(8)上的樣品墊(1)、結合墊(2)、分析膜(3)和吸水墊(7)，其特征在于，所述結合墊(2)上結合有膠體金標記的抗人降鈣素檢測抗體和膠體金標記的抗癌胚抗原檢測抗體，所述分析膜(3)上設有人降鈣素檢測帶T1線(4)、癌胚抗原檢測帶T2線(5)和質控帶C線(6)，所述降鈣素檢測帶T1線(4)、所述癌胚抗原檢測帶T2線(5)和所述質控帶C線(6)上分別包被有抗人降鈣素捕獲抗體、抗癌胚抗原捕獲抗體和羊抗鼠IgG多克隆抗體，人降鈣素和癌胚抗原的氨基酸序列分別為SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:4所示，所述抗人降鈣素檢測抗體對應具有如SEQ ID NO:2～SEQ ID NO:3任一所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗人降鈣素捕獲抗體對應SEQ ID NO:2～SEQ ID NO:3中余下一項所示的氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原檢測抗體對應具有如SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6任一項所示氨基酸序列的抗原表位，所述抗癌胚抗原捕獲抗體對應SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:6中余下一項所示的氨基酸序列的抗原表位。

2.一種如權利要求1所述的甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備抗人降鈣素檢測抗體、抗人降鈣素捕獲抗體、抗癌胚抗原檢測抗體、抗癌胚抗原捕獲抗體和羊抗鼠IgG多克隆抗體；

(2)將抗人降鈣素檢測抗體和抗癌胚檢測抗體用膠體金進行標記，并噴涂在玻璃纖維膜或聚酯膜上，制得結合墊；

(3)將抗人降鈣素捕獲抗體、抗癌胚抗原捕獲抗體以及羊抗鼠IgG抗體分別包被在硝酸纖維素膜的降鈣素檢測帶T1線、癌胚抗原檢測帶T2線以及質控帶C線上制備得到分析膜；

(4)將樣品墊、結合墊、分析膜和吸水墊裁成合適的尺寸，并依次搭接在底板上，制得甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條。

3.根據權利要求2所述的甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述樣品墊的材質為玻璃纖維素膜或聚酯膜。

4.根據權利要求3所述的甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述樣品墊為玻璃纖維膜或聚酯膜經樣品墊處理液浸泡后于室溫、濕度不高于30％的條件下干燥制得，所述樣品墊處理液包括0.01M PBS緩沖液，0.1wt％Tween-20,1wt％牛血清蛋白和10wt％蔗糖。

5.根據權利要求2所述的甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)的具體步驟為：取膠體金溶液100ml，調節pH至6.5～8.0，依次加入0.5～2mg抗人降鈣素檢測抗體和抗癌胚抗原檢測抗體，室溫攪拌1h，用酪蛋白或BSA封閉，12000r/min離心30min，棄上清，用膠體金工作液復溶至70mL，噴涂至玻璃纖維膜上，于室溫、相對濕度不高于30％的條件下干燥得到所述結合墊。

6.根據權利要求5所述的甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述膠體金的直徑為25～35nm。

7.根據權利要求5所述的甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述膠體金工作液包括1wt％牛血清白蛋白、0.1M Tris-Hcl緩沖液和20wt％蔗糖。

8.根據權利要求2所述的甲狀腺髓樣癌聯合檢測膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)的具體步驟為：將所述抗人降鈣素捕獲抗體和抗癌胚抗原捕獲抗體分別用包被緩沖液稀釋至0.5～1.5mg/mL,將羊抗鼠IgG多克隆抗體稀釋至1～2mg/mL，然后以1～2uL/cm分別噴涂于人降鈣素檢測帶T1線、癌胚抗原檢測帶T2線和質控帶C線上，于室溫、相對濕度不高于30％的條件下干燥。