[發明專利]一種干細胞培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201810898296.1
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108913647B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 張光謀;邢雪琨;許重潔;原志慶;豐慧根
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

本發明公開了一種干細胞培養基及其制備方法，屬于細胞培養技術領域，所述培養基包括基礎培養基和添加劑，向所述基礎培養基中添加的各添加劑及其濃度為：原花青素8?10mg/mL、膽甾烯基豆蔻酸酯5?10mg/mL、人參皂苷0.1?0.5mg/mL、轉鐵蛋白0.1?0.2mg/mL、人表皮細胞生長因子微球1.5×10^?3?2×10^?3mg/mL、成纖維細胞生長因子微球1.5×10^?3?2×10^?3mg/mL、棕櫚酸0.7×10^?3?1.2×10^?3mg/mL、胰島素2×10^?3?6×10^?3mg/mL、貽貝粘蛋白2×10^?5?4×10^?5mg/mL，本發明的培養基不含動物血清，通過微球緩釋作用使細胞平穩擴增。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種干細胞培養基及其制備方法。

背景技術

干細胞是一種具有自我復制能力，并且在一定條件下可以分化成多種功能細胞的多潛能細胞，因此干細胞在疾病治療領域具有至關重要的作用，但是干細胞在正常成體組織中含量較低，需要在體外進行擴增和培養，因此如何在體外快速擴增與培養干細胞是干細胞治療疾病的重要環節。

目前用于培養干細胞的培養基中一般都要加入胎牛血清，用于支持細胞生長、執行細胞的功能，但是由于血清組分不確定，并且含有大量成分復雜的蛋白質，給細胞培養的批次化、標準化帶來困難，其次含動物血清的培養基無法規避動物血清中的異源體，并且容易誘導細胞分化，從而給細胞培養表達產品分離純化和結果的重復性帶來困難。

發明內容

針對上述背景，本發明旨在提供一種不含有動物血清的干細胞培養基，為了解決現有技術中存在的問題，本發明還提供干細胞培養基的制備方法。

本發明采用的技術方案是：一種干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，向所述基礎培養基中添加的各添加劑及其濃度為：原花青素8-10mg/mL、膽甾烯基豆蔻酸酯5-10mg/mL、人參皂苷0.1-0.5mg/mL、轉鐵蛋白0.1-0.2mg/mL、人表皮細胞生長因子微球1.5×10^-3-2×10^-3mg/mL、成纖維細胞生長因子微球1.5×10^-3-2×10^-3mg/mL、棕櫚酸0.7×10^-3-1.2×10^-3mg/mL、胰島素2×10^-3-6×10^-3mg/mL、貽貝粘蛋白2×10^-5-4×10^-5mg/mL，所述人表皮細胞生長因子微球中人表皮細胞生長因子的負載量為6.72-7.15mg/g，所述成纖維細胞生長因子微球中成纖維細胞生長因子的負載量為6.45-7.02mg/g，所述基礎培養基為DMEM/F12液體培養基。

優選地，所述人表皮細胞生長因子微球EGF-殼聚糖緩釋微球，所述成纖維細胞生長因子微球為FGF-殼聚糖緩釋微球，通過殼聚糖微球負載包覆細胞生長因子，一方面可以提高細胞生長因子對酸、熱的穩定性，另一發面通過緩釋微球可以使細胞生長因子在培養基中持續、平穩地釋放，使細胞平穩擴增；其次，殼聚糖分子中帶有游離氨基，在弱酸中溶解后呈陽離子性質，因此有助于細胞粘附生長。

本發明中加入的人表皮細胞生長因子微球和成纖維細胞生長因子微球主要用于促進干細胞的生長分裂，原花青素可以清楚自由基對細胞的傷害，膽甾烯基豆蔻酸酯、人參皂苷可以促進干細胞的增殖，轉鐵蛋白能夠調節體內鐵元素的代謝，且能與其他微量元素結合來調節干細胞的生長增殖，胰島素能促進細胞利用葡萄糖和氨基酸的效率，從而加速蛋白質、脂肪酸等的合成，貽貝粘蛋白有助于細胞貼壁生長。

本發明還提供了上述干細胞培養基的制備方法，主要包括以下步驟：