[發明專利]一種干細胞培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201810898296.1
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108913647B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 張光謀;邢雪琨;許重潔;原志慶;豐慧根
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

1.一種干細胞培養基，其特征在于，包括基礎培養基和添加劑，向所述基礎培養基中添加的各添加劑及其濃度為：原花青素8-10mg/mL、膽甾烯基豆蔻酸酯5-10mg/mL、人參皂苷0.1-0.5mg/mL、轉鐵蛋白0.1-0.2mg/mL、人表皮細胞生長因子微球1.5×10^-3-2×10^-3mg/mL、成纖維細胞生長因子微球1.5×10^-3-2×10^-3mg/mL、棕櫚酸0.7×10^-3-1.2×10^-3mg/mL、胰島素2×10^-3-6×10^-3mg/mL、貽貝粘蛋白2×10^-5-4×10^-5mg/mL；

所述人表皮細胞生長因子微球中人表皮細胞生長因子的負載量為6.72-7.15mg/g，所述成纖維細胞生長因子微球中成纖維細胞生長因子的負載量為6.45-7.02mg/g；

所述基礎培養基為DMEM/F12液體培養基；

所述人表皮細胞生長因子微球為EGF-殼聚糖緩釋微球，所述成纖維細胞生長因子微球為FGF-殼聚糖緩釋微球；

所述人表皮細胞生長因子微球的制備：將殼聚糖溶解在體積分數為2％的乙酸溶液中，乙酸溶液中殼聚糖的濃度為8-12mg/mL，然后在超聲分散條件下，將人表皮細胞生長因子加入到殼聚糖乙酸溶液中，磁力攪拌2-3h后加入濃度為100-120mg/mL的硫胺素焦磷酸溶液，繼續攪拌2-3h后離心分離、將沉淀反復漂洗后進行冷凍干燥即得到人表皮細胞生長因子微球，4℃下存放備用；

所述成纖維細胞生長因子微球的制備：將殼聚糖溶解在體積分數為2％的乙酸溶液中，乙酸溶液中殼聚糖的濃度為8-12mg/mL，然后在超聲分散條件下，將成纖維細胞生長因子加入到殼聚糖乙酸溶液中，磁力攪拌2-3h后加入濃度為100-120mg/mL的硫胺素焦磷酸溶液，繼續攪拌2-3h后離心分離、將沉淀反復漂洗后進行冷凍干燥即得到成纖維細胞生長因子微球，4℃下存放備用。

2.一種如權利要求1所述的干細胞培養基的制備方法，包括以下步驟：

S1、人表皮細胞生長因子微球的制備：將殼聚糖溶解在體積分數為2％的乙酸溶液中，乙酸溶液中殼聚糖的濃度為8-12mg/mL，然后在超聲分散條件下，將人表皮細胞生長因子加入到殼聚糖乙酸溶液中，磁力攪拌2-3h后加入濃度為100-120mg/mL的硫胺素焦磷酸溶液，繼續攪拌2-3h后離心分離、將沉淀反復漂洗后進行冷凍干燥即得到人表皮細胞生長因子微球，4℃下存放備用；

S2、成纖維細胞生長因子微球的制備：將殼聚糖溶解在體積分數為2％的乙酸溶液中，乙酸溶液中殼聚糖的濃度為8-12mg/mL，然后在超聲分散條件下，將成纖維細胞生長因子加入到殼聚糖乙酸溶液中，磁力攪拌2-3h后加入濃度為100-120mg/mL的硫胺素焦磷酸溶液，繼續攪拌2-3h后離心分離、將沉淀反復漂洗后進行冷凍干燥即得到成纖維細胞生長因子微球，4℃下存放備用；

S3、向基礎培養基中加入原花青素、膽甾烯基豆蔻酸酯、人參皂苷、轉鐵蛋白、貽貝粘蛋白、S1步驟制備的人表皮細胞生長因子微球以及S2步驟制備的成纖維細胞生長因子微球，攪拌均勻后加入棕櫚酸溶液和胰島素溶液，繼續攪拌至均勻后，靜置得混合物；

S4、向S3步驟的混合物中加入質量分數為9-12％的碳酸鈉溶液，調節培養基pH至6.5-7，最后滅菌即得干細胞培養基。