[發明專利]一種基于雙重熒光PCR法聯合檢測巴泰病毒及泰納病毒的引物探針組及試劑盒

在審

• 申請號: 201810897741.2
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108950078A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 吳德;孫九峰;張鮑歡;談琦琪;梁楚敏;張歡;張欣;周惠瓊;寧丹
• 申請（專利權）人: 廣東省公共衛生研究院;廣東省疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 肖宇揚;付靜

本發明公開了一種雙重熒光PCR法聯合檢測巴泰病毒及泰納病毒的引物探針組，包括針對巴泰病毒的特異性引物及探針、針對泰納病毒的探針及引物，所述針對巴泰病毒的特異性引物包括正向引物和反向引物，針對巴泰病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，針對巴泰病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述針對泰納病毒的特異性引物包括正向引物和反向引物，針對泰納病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，針對泰納病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。本發明的引物探針組及使用引物探針組的試劑盒可以對巴泰病毒及泰納病毒進行有效檢測，檢測靈敏度均可達1×10³copies/ml，有效克服了現有技術中對巴泰病毒、泰納病毒檢測的缺失，具高度產業利用價值。

技術領域

本發明涉及一種聯合檢測巴泰病毒及泰納病毒的引物探針組及試劑盒，特別是涉及一種基于雙重熒光PCR法聯合檢測巴泰病毒及泰納病毒的引物探針組、試劑盒及其使用方法。

背景技術

巴泰病毒(Batai virus,BATV)屬布尼亞病毒目(Bunyavirus)布尼亞病毒科(Peribunyavirus) 布尼亞病毒屬(Bunyavirus)，上世紀50年代首先在馬來西亞的庫蚊中分離到，隨后在歐亞等多個國家和地區的多種媒介中分離到。巴泰病毒感染可引起人類類似流感樣感染癥狀，偶爾引起病毒性腦炎癥狀，該病毒可引起反芻動物的嚴重感染性疾病，包括流產、早產及遺傳缺陷。巴泰病毒是布尼亞病毒科中地理區域分布最為廣泛的病毒，也是媒介多樣性最多的病毒，主要媒介包括多斑按蚊(Anopheles maculipennis)、須喙按蚊(Anopheles barbirostris)、雪背庫蚊(Culex gelidus)、刺伊蚊(Aedes punctor)。人群血清學調查結果顯示在歐洲瑞士、芬蘭、德國、奧地利及南斯拉夫的陽性率低于1％，而在斯洛伐克的陽性率高達32％，而在動物中的陽性率從1％至46％不等，雖然在非洲除烏干達之外并無感染報道，但依據媒介即宿主易感性，推測非洲其它國家也有該病毒的傳播流行。

泰納病毒(Tahyna virus TAHV)屬布尼亞病毒屬(Bunyavirus)，也稱為加利福尼亞腦炎布尼亞病毒(California encephalitis orthobunyavirus)，是一種蚊媒傳播病毒，可引起人類似急性發熱流感樣疾病，偶爾引起不典型肺炎及腦膜炎，哺乳動物感染后可出現短期的病毒血癥，感染病例主要發生在春夏交替季節，受蚊媒密度影響。主要傳播媒介是一些隨洪澇災害發生相伴的維克斯伊蚊(Aedes vexans)。人群血清學調查表明歐洲捷克共和國的人群血清陽性率較高，而澳大利亞陽性率較低，最近對歐洲中部的奧地利、羅馬尼亞及匈牙利的野生蹄類動物的血清學調查表明三個國家的野豬中陽性率平均為15.2％，奧地利的野豬血清中和抗體陽性率為26.7％，馬鹿中為 9.8％，提示泰納病毒在中歐及東歐仍在持續傳播流行，但在西歐國家的流行情況未知。

巴泰病毒及泰納病毒目前報道的流行區域有限，但隨著國際間貿易量增加、旅游人群增長及貨物流動運輸增加及不斷加速的城鎮化進程，人與動物及禽類的接觸更加頻繁，導致人畜共患病傳播流行風險不斷增多，比如最近的基孔肯雅熱病毒及寨卡病毒全球流行傳播，然而，目前全球尚未建立針對這些病毒的預警及應急檢測機制以應對潛在的爆發風險，因而，我們有必要開發新型的、可快速執行的實驗室檢測方法，應對可能的針對巴泰病毒及泰納病毒的應急檢測需求。

發明內容

本發明提供了一種基于雙重熒光PCR法聯合檢測巴泰病毒及泰納病毒的引物探針組、試劑盒及其使用方法，以解決缺少對巴泰病毒及泰納病毒進行有效檢測方法的問題。