[發明專利]一種基于雙重熒光PCR法聯合檢測巴泰病毒及泰納病毒的引物探針組及試劑盒

在審

• 申請號: 201810897741.2
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108950078A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 吳德;孫九峰;張鮑歡;談琦琪;梁楚敏;張歡;張欣;周惠瓊;寧丹
• 申請（專利權）人: 廣東省公共衛生研究院;廣東省疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 肖宇揚;付靜

1.一種基于雙重熒光定量PCR檢測巴泰病毒及泰納病毒的引物探針組，所述引物探針組包括針對巴泰病毒的特異性引物、巴泰病毒探針、針對泰納病毒的特異性引物、泰納病毒探針，所述針對巴泰病毒的特異性引物包括正向引物和反向引物，所述針對巴泰的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述針對巴泰的反向引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示，所述針對泰納病毒的特異性引物包括正向引物和反向引物，所述針對泰納病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述針對泰納病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.如權利要求1所述的引物探針組，其特征在于，所述巴泰病毒探針的探針序列如SEQID No.5所示。

3.如權利要求1所述的引物探針組，其特征在于，所述針對泰納病毒的探針序列如SEQID No.6所示。

4.如權利要求1所述的引物探針組，其特征在于，所述巴泰病毒探針、泰納病毒探針兩端標記有熒光報告基團和熒光淬滅基團。

5.如權利要求4所述的引物探針組，其特征在于，所述巴泰病毒探針5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團。

6.如權利要求5所述的引物探針組，其特征在于，所述泰納病毒探針5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團。

7.如權利要求6所述的引物探針組，其特征在于，所述巴泰病毒探針上標記的熒光報告基團、所述泰納病毒探針上標記的熒光報告基團的熒光波長不相同。

8.一種雙重熒光定量PCR檢測巴泰病毒、泰納病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1-7任一所述引物探針組。

9.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括RNA抽提試劑、RT-PCR試劑和陽性對照中的一種或多種。

10.一種如權利要求8所述的試劑盒的雙重熒光定量PCR檢測巴泰病毒、泰納病毒的檢測方法，具體包括如下步驟：

1)標本的核酸提取：使用病毒RNA抽提試劑盒提取標本RNA；

2)標本RNA逆轉錄：使用RT-PCR試劑，將標本RNA進行逆轉錄PCR，獲得標本的逆轉錄產物；

3)核酸熒光PCR檢測混合液的配制：將針對巴泰病毒的特異性引物、巴泰病毒探針、針對泰納病毒的特異性引物、泰納病毒探針、工藝用水組成核酸熒光PCR檢測混合液體系；

4)試劑配制：對核酸熒光PCR檢測混合液體系進行振蕩混勻，并離心；

5)加樣：將步驟4所得混合液置于PCR管中，然后將步驟2所得標本逆轉錄產物、陽性對照品、DEPC-H₂O分別加入PCR管中，離心后立即進行PCR擴增反應；

6)通過定量熒光PCR儀器對樣品進行PCR反應，并通過熒光信號的強度判斷巴泰病毒和泰納病毒的陽性和陰性。