[發(fā)明專利]基于金納米團(tuán)簇探針的酸性磷酸酶電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810893802.8
• 申請(qǐng)日: 2018-08-08
• 公開（公告）號(hào): CN108827948A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭花萍;黃種南;陳偉;鄧豪華;查代君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76;G01N27/26
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發(fā)明公開一種基于金納米團(tuán)簇探針的酸性磷酸酶電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法。本發(fā)明采用還原法制備高量子產(chǎn)率金納米團(tuán)簇電致化學(xué)發(fā)光探針，以二氧化錳納米材料為電致化學(xué)發(fā)光猝滅劑，利用酸性磷酸酶選擇性水解2?磷酸?L?抗壞血酸三鈉鹽產(chǎn)生的抗壞血酸與二氧化錳的氧化還原反應(yīng)恢復(fù)電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)對(duì)酸性磷酸酶含量的測(cè)定。在2.0×10^?4~2.0×10² U/L的濃度范圍內(nèi)酸性磷酸酶濃度的對(duì)數(shù)值與相對(duì)電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度變化值呈線性關(guān)系，檢測(cè)限為6.5×10^?5 U/L。本發(fā)明操作簡單、成本低、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可用于實(shí)際樣品中酸性磷酸酶的測(cè)定，具有較好的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種金納米團(tuán)簇探針的酸性磷酸酶電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，屬于分析化學(xué)及納米技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

酸性磷酸酶（Acid phosphatase，ACP）是哺乳動(dòng)物體液和組織中的一種水解酶，它能夠在酸性條件下有效地水解磷酸酯，脫去其中的磷酸基團(tuán)，在基因轉(zhuǎn)移、細(xì)胞代謝、神經(jīng)系統(tǒng)等生物過程中起著關(guān)鍵的作用。正常人血清中的酸性磷酸酶主要來源于人體的骨、肝、腎、脾、胰等組織中。在臨床上，異常的酸性磷酸酶濃度暗示了一些疾病的病理過程，例如，前列腺癌、溶血性貧血、甲狀旁腺功能亢進(jìn)與多發(fā)性骨髓瘤等。酸性磷酸酶已被認(rèn)為是一些疾病的生物標(biāo)志物，在疾病診斷、術(shù)后評(píng)估與藥物篩選方面具有重要的意義。目前，用于檢測(cè)酸性磷酸酶檢測(cè)的方法如高效液相色譜法，比色法，熒光分析法，化學(xué)發(fā)光法，電化學(xué)方法等存在如靈敏度和準(zhǔn)確度低、操作過程繁瑣、費(fèi)用較高、檢測(cè)時(shí)間長等不足，極大地限制其在臨床診斷中的應(yīng)用。因此，建立簡單、快速、高靈敏的酸性磷酸酶含量檢測(cè)新方法具有重要的實(shí)際意義。

電致化學(xué)發(fā)光（Electrochemiluminescence，簡稱ECL）是指電活性物質(zhì)在電極表面或電極附近發(fā)生氧化還原反應(yīng)，形成激發(fā)態(tài)，再由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)而產(chǎn)生光輻射的現(xiàn)象。從某種意義上說，ECL是電化學(xué)和光譜方法的理想組合。ECL不僅具有傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光（CL）的靈敏度和寬動(dòng)力學(xué)響應(yīng)范圍，而且還表現(xiàn)出電化學(xué)方法的幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)，包括設(shè)備簡單，可控性強(qiáng)和重現(xiàn)性好。迄今為止，ECL已經(jīng)成為一種強(qiáng)大的分析技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于生命分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)、臨床檢測(cè)等領(lǐng)域。

隨著科技的不斷發(fā)展，納米發(fā)光體已由分子發(fā)光體逐漸發(fā)展為納米發(fā)光體，這些材料包括半導(dǎo)體量子點(diǎn)、碳納米材料、過渡金屬硫族化合物、金屬團(tuán)簇等。金納米團(tuán)簇（Aunanocluster，AuNCs）是最近發(fā)展起來一種新型的ECL發(fā)光體，因其獨(dú)特的性質(zhì)展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力，引起了人們廣泛的關(guān)注。AuNCs直徑接近電子的費(fèi)米波長，因此可出現(xiàn)尺寸依賴的HOMO-LUMO能級(jí)躍遷及熒光現(xiàn)象。此外低毒性、催化性能和生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)，使其在ECL分析中有著廣泛的應(yīng)用前景。雖然目前基于AuNCs熒光性質(zhì)的研究與應(yīng)用已經(jīng)取得相當(dāng)豐富的成果，但基于AuNCs的ECL方面的研究還相對(duì)較少，可能是由于還存在ECL強(qiáng)度小、發(fā)光機(jī)制尚未闡明等問題。因此，構(gòu)建一個(gè)新型高效的ECL傳感器顯得尤為重要。本課題組通過納米尺度調(diào)控成功實(shí)現(xiàn)高量子產(chǎn)率金納米團(tuán)簇電致化學(xué)發(fā)光探針的制備，并在此基礎(chǔ)上建立了一系列新型高效電致化學(xué)發(fā)光生命分析平臺(tái)。

本發(fā)明以金納米團(tuán)簇為電致化學(xué)發(fā)光探針，以二氧化錳納米片為猝滅劑，基于酸性磷酸酶選擇性水解2-磷酸-L-抗壞血酸三鈉鹽產(chǎn)生的抗壞血酸與二氧化錳的氧化還原反應(yīng)恢復(fù)電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，建立一種高靈敏、高選擇、快速的酸性磷酸酶測(cè)定新方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種以金納米團(tuán)簇為電致化學(xué)發(fā)光探針的酸性磷酸酶測(cè)定方法。