[發明專利]基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法

在審

• 申請號: 201810893802.8
• 申請日: 2018-08-08
• 公開（公告）號: CN108827948A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 彭花萍;黃種南;陳偉;鄧豪華;查代君
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/26
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是：首先在電極表面修飾金納米團簇，通過還原法制備高量子產率金納米團簇電致化學發光探針，并進一步在電極表面修飾二氧化錳納米材料，將其作為電致化學發光猝滅劑；將酸性磷酸酶加入2-磷酸-L-抗壞血酸三鈉鹽溶液中，酸性磷酸酶選擇性水解2-磷酸-L-抗壞血酸三鈉鹽產生抗壞血酸，進而將修飾電極浸入上述反應液中，產生的抗壞血酸與二氧化錳發生氧化還原反應；采集修飾電極的電致化學發光信號，根據電致化學發光信號的改變實現酸性磷酸酶的測定。

2.根據權利要求1所述的一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是所述還原法制備高量子產率金納米團簇電致化學發光探針采用下述的電化學還原法或化學還原法制備：

（1）電化學還原法：采用三電極體系，以金納米團簇修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，Ag/AgCl為參比電極，將上述電極插入0.1 mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液中，施加-1.4 V~-2 V范圍內負電位電壓，進行恒電位還原處理5 min~1 h，得到電化學發光金納米團簇探針；

（2）化學還原法：將金納米團簇修飾玻碳電極浸泡在0.1~1 mol/L硼氫化鈉溶液反應5min~30 min，得到化學還原法制備的金納米團簇探針修飾電極。

3.根據權利要求1、2所述的一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是所述金納米團簇為功能化修飾金納米團簇，采用N-乙?；?L-半胱氨酸-金納米團簇或谷胱甘肽-金納米團簇。

4.根據權利要求1所述的一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是所述在電極表面修飾二氧化錳納米材料的方法為電化學沉積法：采用三電極體系，以還原法處理金納米團簇修飾電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，Ag/AgCl為參比電極，采用I-T法，在1:1 V/V 的KMnO₄-H₂SO₄溶液中，電化學沉積二氧化錳，電位為-0.1~-0.5 V，沉積時間為100 s~600 s，清洗，氮氣吹干。

5.根據權利要求1所述的一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是所述采集修飾電極的電致化學發光信號方法如下：采用三電極體系進行測試，以修飾電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，Ag/AgCl為參比電極，緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液或Tris-HCl緩沖溶液，所用電解質為KCl或KNO₃；將上述電極插入含有過硫酸根離子共反應劑的緩沖溶液中，采用階躍脈沖法進行電化學發光測試，初始電位為0 V，脈沖時間為10 s，終止電位為-2 V，脈沖時間為1 s，光電倍增管高壓設置為600~800 V，檢測電致化學發光輻射信號。

6.根據權利要求1所述的一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是所述產生的抗壞血酸與二氧化錳發生氧化還原反應的pH 為8.0，反應時間為4min。

7.根據權利要求5所述的一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是采集修飾電極的電致化學發光信號的磷酸鹽緩沖溶液或Tris-HCl緩沖溶液的pH值為7.4，過硫酸根離子濃度為0.1 mol/L。

8.根據權利要求1所述的一種基于金納米團簇探針的酸性磷酸酶電致化學發光測定方法，其特征是電致化學發光強度變化值與抗壞血酸濃度的對數值在2.0×10^-4~2.0×10² U/L的范圍內呈線性關系，檢測限為6.5×10^-5 U/L。