[發明專利]擬中肋骨條藻的快速檢測方法及試紙條的制備與使用方法

在審

• 申請號: 201810893079.3
• 申請日: 2018-08-07
• 公開（公告）號: CN109085356A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發明（設計）人: 周克夫;孟坤;張長弓;李明洋;陳闖;王心怡;王英子
• 申請（專利權）人: 廈門大學;廈門市波生生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

擬中肋骨條藻的快速檢測方法及試紙條的制備與使用方法，涉及基于膠體金免疫層析分析技術的浮游藻類免疫層析檢測。提供擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條、擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條的制備方法、擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條的使用方法和擬中肋骨條藻的免疫層析檢測方法。通過免疫學技術，以藻細胞免疫實驗動物，制備浮游藻的單克隆抗體，利用抗體，建立GICA的免疫分析方法。又通過比色板，對GICA的顯色結果進行較別，估算出赤潮藻在水體當中的濃度。直接將含藻的水樣滴加到試紙條上即可獲得結果陽性，并且可以根據反應的的強弱給出藻細胞濃度的大致數值結果。

技術領域

本發明涉及基于膠體金免疫層析分析技術(gold immune chromatographya55ay，GICA)的浮游藻類免疫層析檢測，尤其是涉及擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條及其制備檢測方法領域和擬中肋骨條藻細胞濃度監測領域，其屬于免疫學和浮游生物學交叉技術領域。

背景技術

浮游植物的分類、鑒定和定量一直是藻類學和生態學研究中最基礎的課題之一，對生態動力學、赤潮發生機制與預警預報、海水養殖水域常規檢測等都有著重要意義。對于常規環境監測、漁業養殖水體檢測等應用領域來說，需要一種對主要赤潮藻進行現場快速檢測的方法。本發明內容主要以在東南沿海主要的的赤潮藻中肋骨條藻中的擬中肋骨條藻為研究對象，涉及海洋浮游植物的檢測技術和膠體金免疫層析分析技術兩個領域。

現有的有關赤潮藻的檢測方法主要有基于形態學特征的分析方法、基于細胞色素的檢測方法、基于分子探針的檢測方法、以及不同技術的交叉，如流式細胞術和FLOWCAM技術等。這些技術極大地豐富了浮游植物觀測技術，推動了相關研究的發展，各項技術均有著突出的優勢但也存在著難以克服的制約因素。現有的浮游藻類檢測方法主要包括：

1、基于形態學特征的分析方法：傳統的基于形態學的光鏡和電鏡觀測技術是浮游植物鑒定與定量的基礎，至今仍有著不可動搖的地位，發揮著很重要的作用。但其存在著耗時長，需要富有經驗的專家、專業儀器設備等限制性因素。FLOWCAM技術是形態學與流式細胞術的結合，利用計算機技術對捕獲的照片進行識別分類。相對傳統技術，這一技術加快了分析的速度，但是仍然存在需要專家干預、形態相似的種類無法區分等缺點。同時，由于技術的限制，該技術獲得的圖像分辨率較差，更在一定程度上影響了識別的準確度[曾呈奎,相建海.海洋生物技術[M].濟南:山東科學技術出版社,1998.416-429；米鐵柱,甄毓,于志剛,等.海洋浮游藻類檢測技術發展及其展望[J].高技術通訊,2003,13(3,增刊):96-100].。

2、流式細胞術：該技術通過逐個測量細胞的散射光、細胞自體熒光、染色熒光和免疫標記熒光等來檢測其生理生化指標并對其分類、收集，現已成為環境微生物學中的十分有用的工具。該技術的限制主要是在環境變化的情況下，細胞的形態、大小及生理生化特性會發生顯著變化，而這正是流式細胞術的檢測基礎，這將影響該技術對于各種類的正確區分。同時，儀器成本較高、對工作環境要求嚴格、需要良好訓練的專業技術人員等因素也限制了應用[Collier J L.Flow cyt om et ry and the single cell inphycology[J].Journal of Phycology,2000,36(4):1529-8817.]。