[發(fā)明專利]擬中肋骨條藻的快速檢測方法及試紙條的制備與使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810893079.3
• 申請日: 2018-08-07
• 公開（公告）號: CN109085356A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周克夫;孟坤;張長弓;李明洋;陳闖;王心怡;王英子
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué);廈門市波生生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條，其特征在于設(shè)有塑料載體板、玻璃纖維膜樣品層、玻璃纖維膜抗體標記層、硝酸纖維膜檢測層和玻璃纖維膜吸水層；所述玻璃纖維膜樣品層、玻璃纖維膜抗體標記層、硝酸纖維膜檢測層和玻璃纖維膜吸水層依次膠合固定在塑料載體板的一側(cè)；所述硝酸纖維膜檢測層上設(shè)有擬中肋骨條藻抗原檢測線和二抗質(zhì)控線；所述玻璃纖維膜吸水層膠合在硝酸纖維膜檢測層的右端上；所述塑料載體板的中部設(shè)有硝酸纖維膜檢測層，在硝酸纖維膜檢測層與玻璃纖維膜樣品層之間設(shè)有載有膠體金標記的擬中肋骨條藻抗體的玻璃纖維膜抗體標記層，所述玻璃纖維膜抗體標記層的一端置于玻璃纖維膜樣品層下并與塑料載體板膠合，玻璃纖維膜抗體標記層的另一端設(shè)置在硝酸纖維膜檢測層上并與硝酸纖維膜檢測層膠合。

2.如權(quán)利要求1所述擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條，其特征在于所述硝酸纖維膜檢測層上的二抗質(zhì)控線包被有羊抗鼠IgG；所述玻璃纖維膜抗體標記層上載有膠體金標記的小鼠抗擬中肋骨條藻單克隆抗體。

3.如權(quán)利要求1所述擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條，其特征在于所述膠體金標記是以膠體金作為示蹤標記物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)，并最終通過反應(yīng)結(jié)果輸出藻細胞濃度；膠體金是由氯金酸在還原劑作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱為膠體金；利用膠體金在堿性環(huán)境中帶負電荷的性質(zhì)，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團藉靜電吸引而形成牢固結(jié)合，除抗體蛋白外，膠體金還可與其他多種生物大分子結(jié)合，根據(jù)膠體金的物理特性，加上結(jié)合物所具有的免疫-生物學(xué)特性，使其在免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)及細胞生物學(xué)標記研究工作中得到廣泛應(yīng)用；所述還原劑包括白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉和鞣酸；所述膠體金的物理特性包括高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)。

4.如權(quán)利要求1～3所述擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條的制備方法，其特征在于其具體步驟如下：

通過已知擬中肋骨條藻濃度樣品試驗，確定檢測藻細胞樣品需要的捕獲抗原濃度，在膜上劃檢測線，得擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條。

5.如權(quán)利要求1～3所述擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條的使用方法，其特征在于所述方法如下：

將被檢測樣品溶液取出80～100μL，直接滴在擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條加樣處，最快3min平均約15min后觀察結(jié)果，顯色穩(wěn)定后，根據(jù)不同濃度抗原與抗體反應(yīng)后在擬中肋骨條藻的免疫層析檢測分析試紙條上顯示顏色的不同，建立顏色深淺與藻細胞濃度之間的關(guān)系，得到顏色深淺與藻細胞濃度之間的擬合關(guān)系，然后通過將顯色結(jié)果與比色板進行比對，估算出藻細胞濃度。

6.擬中肋骨條藻的免疫層析檢測方法，其特征在于所述方法如下：

建立以GICA技術(shù)為基礎(chǔ)，通過提取顯色結(jié)果中的顏色信息，對應(yīng)到程序當中設(shè)置的顏色信息和藻細胞之間的擬合關(guān)系公式，得出藻細胞濃度。

7.抗體金探針的制備方法，其特征在于所述抗體金探針為膠體金標記的抗體，其制備方法如下：

采用膠體金制備方法，優(yōu)化膠體金標記的實驗條件，取得穩(wěn)定高效的抗體金探針，透析純化目標藻抗體，檢驗制備的膠體金的顆粒直徑、均勻度指標，制備膠體金，得抗體金探針；所述膠體金制備方法采用抗壞血酸還原法、鞣酸—檸檬酸三鈉還原法、乙醇超聲波還原法中的一種；所述膠體金為20～30nm的膠體金，4℃保存。

8.如權(quán)利要求7所述抗體金探針的制備方法，其特征在于將標記好的抗體金探針在蔗糖或硅膠中濃縮保存，選用凝膠過濾法純化抗體金探針，用牛血清白蛋白作穩(wěn)定劑，除去其中未標記的抗體，未反應(yīng)的膠體金以及在標記過程中形成的各種聚合物，對純化后免疫金探針的特異性、敏感性進行鑒定，判斷其是否仍保持很好的生物學(xué)活性。