[發(fā)明專利]一種復(fù)合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810892803.0
• 申請(qǐng)日: 2018-08-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109053850A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張江南
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 張江南
• 主分類號(hào): C07J63/00
• 分類號(hào): C07J63/00
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 朱孔妙

本發(fā)明提供了一種復(fù)合酶增產(chǎn)復(fù)合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法，提取過(guò)程中采用復(fù)合酶增產(chǎn)科羅索酸，采用破壁浸提，細(xì)胞破碎充分，提高了提取率，制得的科羅索酸純度高，最高為98％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物提取領(lǐng)域，特別涉及一種復(fù)合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法

背景技術(shù)

金蓮花，多年生草本，高30-70cm。全株無(wú)毛。莖直立，不分枝，疏生2-4葉。基生葉1-1，長(zhǎng)16-36cm，有長(zhǎng)柄，柄長(zhǎng)12-30cm，基部具狹鞘；葉片五角形，長(zhǎng)3.8-6.8cm，寬6.8-12.5cm，3全裂，中央全裂片菱形，先端急尖，3裂達(dá)中部或稍超過(guò)中部，邊緣具不等人的三角形稅鋸齒；例全裂片斜扇形，2深裂近基部，上方深裂片與中央全裂片相似，下方深裂片較小，斜菱形；莖生葉互生，葉形與基生葉相似，生于莖下部的葉具長(zhǎng)柄，上部葉較小，具短柄或無(wú)柄?；▋尚?，單朵頂生或2-3朵排列成稀疏的聚傘花序，直徑3.8-5.5cm；花梗長(zhǎng)5-9cm；苞片3裂；萼片通常10-15，金黃色，干時(shí)不變綠色，橢圓狀卵形或倒卵形，長(zhǎng)1.5-2.8cm，寬7-16mm，先端疏生三角形牙齒，間或?yàn)?個(gè)小裂片，或?yàn)椴幻黠@的小牙齒；花瓣(蜜葉)18-21，狹線形，稍長(zhǎng)于萼片或萼烏片等長(zhǎng)，長(zhǎng)1.8-2.2cm，寬1.2-1.5mm，無(wú)端漸狹，近基部有蜜槽；雄蕊多數(shù)，長(zhǎng)5-11mm，螺旋狀排列，花絲線形，花藥在側(cè)面開(kāi)裂，長(zhǎng)3-4mm；心皮20-30。蓇葖果，長(zhǎng)1-1.2cm，寬約3mm，具脈網(wǎng)，喙長(zhǎng)約1mm。花期6-7月，果期8-9月。金蓮花中含科羅索酸，藜蘆酸(veratricacid)，葒草甙(orientin)，牡荊甙(vitexin)，黎蘆酰胺(veratramide)，棕櫚酸(palmiticacid)?？屏_索酸(corosolicacid)，2α-羥基熊果酸(2-alpha-hydroxyursolicacid)，

科羅索酸降血糖作用的研究源于對(duì)菲律賓、馬來(lái)西亞等東南亞國(guó)家傳統(tǒng)降血糖保健飲料原料大葉紫薇葉的研究。1940年，Garcia采用以1～2g大葉紫薇干葉/kg體重的劑量喂養(yǎng)普通家兔，發(fā)現(xiàn)每24h家兔的血糖水平平均下降16～49mg/L。1956年，Garcia又采用大葉紫薇葉提取物進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其具有降低糖尿病病人血糖的效果。1993年，Murakami等從大葉紫薇的葉中分離出2種三萜酸科羅索酸和山楂酸，發(fā)現(xiàn)科羅索酸具有降血糖的效果。目前，對(duì)科羅索酸降血糖的作用，已從體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)等方面進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。在體外實(shí)驗(yàn)中，1993年，Murakami等以腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)大葉紫薇提取物可刺激細(xì)胞膜的葡萄糖運(yùn)輸通道，增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的利用，進(jìn)而降低血糖含量，此作用與胰島素降糖作用機(jī)理相似。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，1999年，Hamamoto等制備了一種含1％(w/w)科羅索酸的大葉紫薇提取物膠囊，將其喂養(yǎng)小鼠，喂養(yǎng)后90min，小鼠的血糖水平比對(duì)照組明顯下降。此外，在兔子體內(nèi)也進(jìn)行了科羅索酸降糖作用實(shí)驗(yàn)。對(duì)禁食24h正常的兔子喂食科羅索酸，考察喂食一段時(shí)間后血糖含量，結(jié)果表明，大劑量服用科羅索酸引起的血糖降低與服用兩個(gè)單位的胰島素相似。大劑量服用科羅索酸可以帶來(lái)57mg/ml的血糖降低。正常兔子口服科羅索酸會(huì)帶來(lái)16～49mg/ml的血糖降低。2個(gè)多小時(shí)后再次給藥會(huì)使血糖保持在低水平上，甚至略微有所下降，此過(guò)程會(huì)保持5個(gè)多小時(shí)。大劑量服用克羅索酸會(huì)帶來(lái)40～58mg/ml的血糖降低。血糖降低的峰值期出現(xiàn)在服藥后2～4h，6～10h后血糖恢復(fù)到正常水平。血糖下降明顯和科羅索酸攝入量有關(guān)。臨床實(shí)驗(yàn)中，1999年Ikeda等采用含大葉紫薇提取物的膠囊對(duì)糖尿病病人進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其具有治療糖尿病的作用。William等將含1％(w/w)科羅索酸的大葉紫薇甲醇提取物制備為軟膠囊和硬膠囊，對(duì)56名II型糖尿病人進(jìn)行了臨床觀察，結(jié)果表明，每人每天供給劑量32mg和48mg的兩組，兩周后，他們的血糖水平有明顯下降，服用軟膠囊組的病人，其血糖水平平均下降30％，服用硬膠囊組的病人，其血糖水平平均下降20％，表明兩種膠囊都具有降血糖的效果，且軟膠囊的降糖效果優(yōu)于硬膠囊。將大鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、大葉紫薇總?cè)聘邉┝拷M和低劑量組,正常對(duì)照組與模型對(duì)照組喂服生理鹽水,高、低劑量組分別按大鼠體重的0.025％和0.01％喂服大葉紫薇總?cè)莆狗?8d后,測(cè)葡萄糖耐量、血糖、尿糖、血脂、體重和糖化血紅蛋白以考察大葉紫薇總?cè)茖?duì)糖尿病大鼠的降血糖作用.結(jié)果表明:大葉紫薇總?cè)颇芊浅ｏ@著地改善糖尿病大鼠的葡萄糖耐量,降低糖尿病大鼠的血糖,尿糖,血清TC,TG,LDL-C和糖化血紅蛋白,升高HDL-C.因此,大葉紫薇總?cè)茖?duì)糖尿病大鼠有降糖效果。