[發(fā)明專利]一種復合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810892803.0
• 申請日: 2018-08-07
• 公開（公告）號: CN109053850A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設計）人: 張江南
• 申請（專利權）人: 張江南
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 朱孔妙

1.一種復合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法，包括如下步驟：

S1、將金蓮花粉碎后用在75％酒精中浸泡滅菌，加入培養(yǎng)基，接種復合酶，培養(yǎng)0.3～0.5天，調(diào)節(jié)pH值至3.5～4.5，以保持科羅索酸的穩(wěn)定性，然后破壁浸提，之后離心取上清液；

S2、分離后的濾渣經(jīng)濃度為30％的乙醇水溶液進行充分溶解，得到混合液，過濾，得到過濾液，合并上清液和過濾濾液；

S3、經(jīng)大孔樹脂吸附至飽和，用水沖至PH值在7.0以上，然后用濃度為10％～50％的乙醇進行解析，乙醇用量為樹脂體積的3倍，收集解析液，解析液壓力-0.070～0.095Mpa，50～60℃條件下，經(jīng)減壓回收乙醇，得到科羅索酸濃縮液，其比重在1.1～121之間；

S4、科羅索酸濃縮液在70～85℃之間進行真空干燥，得含量為40％的科羅索酸粗品，將科羅索酸在醇溶液中進行重結晶，得到科羅索酸成品，其純度在96％以上。

2.根據(jù)權利要求1所述的復合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法，其特征在于：步驟S1中所述的復合酶為產(chǎn)科羅索酸菌株，其篩選方法如下：

采用組織塊法，取金蓮花樣品在75％酒精中滅菌60～90s數(shù)次，用無菌水沖洗多次，再在5％次氯酸鈉溶液中表面消毒30s，消毒后將其接種到改良的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基的平板上，再分別將其置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h和28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d，檢測培養(yǎng)基中科羅索酸的濃度，選擇濃縮最大的菌株作為產(chǎn)生科羅索酸的菌株；其中所述的改良牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基為：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、瓊脂20g、Al³⁺0.75mmol，用蒸餾水定容到1L，pH值調(diào)為7.4。

3.根據(jù)權利要求1所述的復合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法，其特征在于：步驟S1中所述破壁浸提是在輸出功率為600W的微波條件下處理1～3分鐘，用乙醇在溫度為70～90℃條件下提取兩次，第一次90分鐘，第二次30分鐘，合并兩次提取液。

4.根據(jù)權利要求1所述的復合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法，其特征在于：步驟S3是將上清液加入樹脂吸附柱中，用5～10倍柱體積的水沖洗至PH值在7.0以上，再用5～10倍柱體積的體積分數(shù)為10％～50％的乙醇溶液洗柱，收集洗脫液，洗脫液用無水乙醇溶解，將上清液過活性炭柱，收集液體。

5.根據(jù)權利要求4所述的復合酶增產(chǎn)科羅索酸的方法，其特征在于：步驟S4中，采用的大孔樹脂為AB-8大孔吸附樹脂，用水沖至PH值在6.0～7.0之間，然后用濃度為80％～90％的乙醇進行解析，乙醇用量為樹脂體積的3倍，收集解析液。