[發明專利]抗Her2/PD-1雙特異性抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 201810888976.5
• 申請日: 2018-08-07
• 公開（公告）號: CN109021110A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 劉金濤;宋莉
• 申請（專利權）人: 蘇州塞恩塔生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種在中華倉鼠卵巢細胞(CHO)中表達生產雙特異性抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)以pCHO1.0為表達載體，構建分別表達抗Her2單克隆抗體、表達抗PD-1單克隆抗體的中華倉鼠卵巢細胞工程菌細胞株；

(2)培養所述工程菌細胞株，分別產抗Her2單克隆抗體、抗PD-1單克隆抗體；

(3)將抗Her2單克隆抗體、抗PD-1單克隆抗體組裝，形成Her2/PD-1雙特異性抗體。

2.根據權利要求1所述的一種在中華倉鼠卵巢細胞(CHO)中表達生產雙特異性抗體的方法，其特征在于，所述抗Her2單克隆抗體的重鏈、輕鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO.5、SEQID NO.2所示。

3.根據權利要求2所述的一種在中華倉鼠卵巢細胞(CHO)中表達生產雙特異性抗體的方法，其特征在于，所述抗PD-1單克隆抗體的重鏈、輕鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO.6、SEQID NO.4所示。

4.根據權利要求1所述的一種在中華倉鼠卵巢細胞(CHO)中表達生產雙特異性抗體的方法，其特征在于，步驟(2)培養工程菌細胞株的方法，是將二級種子細胞按(1.0±0.3)×10⁶個/ml的接種密度稀釋至3L細胞培養反應器中，3L細胞培養反應器中裝有1L的基礎培養基，設置攪拌轉速為250～280r/min，pH設置為6.95±0.15，通過碳酸氫鈉溶液和CO₂調節pH；溶解氧設置為40±20％；1～4天培養溫度設置為36.5±0.5℃；培養第5天降溫至33.5±0.5℃；培養第14天收獲；第3、5、7、9、11天用補料培養基進行補料，補加補料培養基A和補料培養基B，補料培養基A的補料體積為初始培養體積的4％，補料培養基B的補料體積為初始培養體積的0.4％，當葡萄糖濃度低于2.0～3.0g/L時，添加葡萄糖濃縮液提高細胞培養液的葡萄糖濃度至4.0～5.0g/L。

5.根據權利要求4所述的一種在中華倉鼠卵巢細胞(CHO)中表達生產雙特異性抗體的方法，其特征在于，所述基礎培養基是Dynamis AGT 24.8g/L；所述葡萄糖濃縮液是200g/L的葡萄糖溶液；所述補料培養基A是CHO CD EfficientFeed A；所述補料培養基B是CHO CDEfficientFeed B。

6.根據權利要求4所述的一種在中華倉鼠卵巢細胞(CHO)中表達生產雙特異性抗體的方法，其特征在于，步驟(2)還包括對抗Her2單克隆抗體、抗PD-1單克隆抗體進行純化的過程，是將工程菌的培養上清進行深層過濾去除細胞，收獲澄清液，采用GE MabselectedSure填料，親和純化抗Her2抗體和抗PD-1抗體。

7.根據權利要求1～6任一所述的一種在中華倉鼠卵巢細胞(CHO)中表達生產雙特異性抗體的方法，其特征在于，步驟(3)將純化后的抗Her2抗體和抗PD-1抗體按照1：1比例混合，添加精氨酸和還原性谷胱甘肽至終濃度分別為10～200mM和60～140mM，用Tris調節pH至7.5～8.5，37℃孵育3～5小時。

8.根據權利要求1～7任一所述方法制備得到的抗Her2/PD-1雙特異性抗體。

9.權利要求8所述的抗Her2/PD-1雙特異性抗體在制備用于治療癌癥的藥物中的應用。