[發明專利]一種口蹄疫多型表位肽、疫苗及其應用

在審

• 申請號: 201810876209.2
• 申請日: 2018-08-03
• 公開（公告）號: CN109053898A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 格日勒圖;吳咪;黃天鵬;朝木麗格;王云沖
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明公開了一種口蹄疫多型表位肽、疫苗及其應用，涉及生物技術領域。本發明的口蹄疫多型表位肽是以瑞士乳桿菌S層蛋白(T?8)基因為模板，設計引物，將O、A及Asia I3型FMDV的VP1特定表位基因嵌入到所述S層蛋白自我組裝區域，再連接表達載體pGEX?4T?3，并轉化到大腸桿菌BL21中進行表達，表達產物用SDS?PAGE鑒定，獲得口蹄疫多型表位肽。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種口蹄疫多型表位肽、疫苗及其應用。

背景技術

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病，主要感染牛、豬和羊等多種家畜和野生哺乳動物，對畜牧產業和國民經濟造成嚴重的損失。FMD已成世界性分布、雖然化學方法滅活的全病毒肽在FMD的預防和控制過程中發揮著中藥的作用，但是，在肽應用實踐中凸顯出很多不足。如純化病毒顆粒難度大，病毒株儲存條件苛刻，肽接種免疫效果不穩定等。FMDV在血清學上分7個血清型，即A/O/C/SAT/SAT2/SAT3和Asia I，每一型又多個亞型。在我國目前同時存在A型、O型和Asia I型。

目前口蹄疫基因工程亞單位肽又稱生物合成亞單位肽或重組單位肽，是指將保護性抗原基因在原核或真核細胞中表達，并以基因產物-蛋白質或多肽制成肽。目前口蹄疫基因工程亞單位肽大多都是單價苗。由于各血清型之間的抗原性不同，此間又無交叉免疫現象，此單價苗的預防效果比較有限。雖然以FMDV-A/C為代表大的基因工程多價苗已經誕生，在膝鼠和牛體實驗中獲得了喜人的結果，其對插入基因表達產物的免疫原性不高，有部分動物可以抵抗強毒攻擊，對動物免疫效果比傳統肽低。

如何研制出高效、安全、抗原表達量高的嵌合多價亞單位肽仍然是科研工作者面臨的主要問題。

發明內容

有鑒于此，本發明實施例提供了一種口蹄疫多型表位肽、疫苗及其應用。

為達到上述目的，本發明主要提供了如下技術方案：

一方面，本發明實施例提供了一種口蹄疫多型表位肽，所述肽是以瑞士乳桿菌S層蛋白(T-8)基因(其氨基酸序列為SEQ ID NO.9)為模板，設計引物，將O、A及Asia I3型FMDV的VP1特定表位基因嵌入到所述S層蛋白自我組裝區域，再連接表達載體pGEX-4T-3，并轉化到大腸桿菌BL21中進行表達，表達產物用SDS-PAGE鑒定，獲得口蹄疫多型表位肽，其氨基酸序列為SEQ ID NO.10，核苷酸序列NO.11。

作為優選，所述構建方法中設計的引物：

引物對1的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.1，下游引物核苷酸序列為SEQ IDNO.2；

引物對2的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.3，下游引物核苷酸序列為SEQ IDNO.4；

引物對3的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.5，下游引物核苷酸序列為SEQ IDNO.6；

引物對4的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.7，下游引物核苷酸序列為SEQ IDNO.8。

作為優選，所述口蹄疫多型表位肽的構建方法具體包括以下步驟：

(1)以所述S層蛋白(T-8)核酸為模板，通過所述引物對1進行PCR擴增得到擴增產物1；利用引物對2進行PCR擴增得到擴增產物2；將所述擴增產物1和所述擴增產物2的混合物作為模板，利用所述引物對1的上游引物和所述引物對2的下游引物作為新引物對進行PCR擴增得到擴增產物3；