[發(fā)明專利]一種口蹄疫多型表位肽、疫苗及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810876209.2 | 申請(qǐng)日： | 2018-08-03 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109053898A | 公開（公告）日： | 2018-12-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 格日勒?qǐng)D;吳咪;黃天鵬;朝木麗格;王云沖 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C07K19/00 | 分類號(hào)： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/135;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 010018 內(nèi)蒙古*** | 國省代碼： | 內(nèi)蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 表位肽 口蹄疫 蛋白 疫苗 生物技術(shù)領(lǐng)域 大腸桿菌 瑞士乳桿菌 表達(dá)產(chǎn)物 表達(dá)載體 表位基因 設(shè)計(jì)引物 組裝區(qū)域 再連接 嵌入 應(yīng)用 轉(zhuǎn)化 | ||
1.一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述表位肽是以核苷酸序列為SEQ ID NO.9的瑞士乳桿菌S層蛋白(T-8)基因?yàn)槟０澹O(shè)計(jì)引物，將O、A及Asia I3型FMDV的VP1特定表位基因嵌入到所述S層蛋白自我組裝區(qū)域，再連接表達(dá)載體pGEX-4T-3，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE鑒定，獲得口蹄疫多型表位肽，其氨基酸序列為SEQ IDNO.10。
2.權(quán)利要求1所述的一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述構(gòu)建方法中設(shè)計(jì)的引物：
引物對(duì)1的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.1，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.2；
引物對(duì)2的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.3，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.4；
引物對(duì)3的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.5，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.6；
引物對(duì)4的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.7，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.8。
3.如權(quán)利要求2所述的一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述口蹄疫多型表位肽的構(gòu)建方法具體包括以下步驟：
(1)以所述S層蛋白(T-8)核酸為模板，通過所述引物對(duì)1進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物1；利用引物對(duì)2進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物2；將所述擴(kuò)增產(chǎn)物1和所述擴(kuò)增產(chǎn)物2的混合物作為模板，利用所述引物對(duì)1的上游引物和所述引物對(duì)2的下游引物作為新引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物3；
(2)以所述S層蛋白(T-8)核酸為模板，通過所述引物對(duì)2的上游引物和所述引物對(duì)3的下游引物作為引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物5；以所述擴(kuò)增產(chǎn)物3為模板，利用所述引物對(duì)1的上游引物和所述引物對(duì)2的下游引物作為引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物4；以所述擴(kuò)增產(chǎn)物5和所述擴(kuò)增產(chǎn)物4的混合物為模板，利用所述引物對(duì)1的上游引物和所述引物對(duì)3的下游引物作為新引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物6；
(3)以所述S層蛋白(T-8)核酸為模板，利用所述引物對(duì)4進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物8；以所述擴(kuò)增產(chǎn)物6為模板，利用所述引物對(duì)1的上游引物和所述引物對(duì)3的下游引物作為引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物7；以所述擴(kuò)增產(chǎn)物7和所述擴(kuò)增產(chǎn)物8的混合物為模板，利用所述引物對(duì)1的上游引物和所述引物對(duì)4的下游引物作為新引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物9，所述擴(kuò)增產(chǎn)物9即為口蹄疫多型表位肽。
4.如權(quán)利要求3所述一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述擴(kuò)增產(chǎn)物1和所述擴(kuò)增產(chǎn)物2的混合摩爾比為1:1；所述擴(kuò)增產(chǎn)物5和所述擴(kuò)增產(chǎn)物4的混合摩爾比為1:1；所述擴(kuò)增產(chǎn)物7和所述擴(kuò)增產(chǎn)物8的混合摩爾比為1:1。
5.一種疫苗，其特征在于，所述疫苗包含權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的口蹄疫多型表位肽。
6.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的一種口蹄疫多型表位肽在制備預(yù)防或治療口蹄疫藥物中的應(yīng)用。
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