[發明專利]一種口蹄疫多型表位肽、疫苗及其應用

在審

• 申請號: 201810876209.2
• 申請日: 2018-08-03
• 公開（公告）號: CN109053898A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 格日勒圖;吳咪;黃天鵬;朝木麗格;王云沖
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述表位肽是以核苷酸序列為SEQ ID NO.9的瑞士乳桿菌S層蛋白(T-8)基因為模板，設計引物，將O、A及Asia I3型FMDV的VP1特定表位基因嵌入到所述S層蛋白自我組裝區域，再連接表達載體pGEX-4T-3，并轉化到大腸桿菌BL21中進行表達，表達產物用SDS-PAGE鑒定，獲得口蹄疫多型表位肽，其氨基酸序列為SEQ IDNO.10。

2.權利要求1所述的一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述構建方法中設計的引物：

引物對1的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.1，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.2；

引物對2的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.3，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.4；

引物對3的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.5，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.6；

引物對4的上游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.7，下游引物核苷酸序列為SEQ ID NO.8。

3.如權利要求2所述的一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述口蹄疫多型表位肽的構建方法具體包括以下步驟：

(1)以所述S層蛋白(T-8)核酸為模板，通過所述引物對1進行PCR擴增得到擴增產物1；利用引物對2進行PCR擴增得到擴增產物2；將所述擴增產物1和所述擴增產物2的混合物作為模板，利用所述引物對1的上游引物和所述引物對2的下游引物作為新引物對進行PCR擴增得到擴增產物3；

(2)以所述S層蛋白(T-8)核酸為模板，通過所述引物對2的上游引物和所述引物對3的下游引物作為引物對進行PCR擴增得到擴增產物5；以所述擴增產物3為模板，利用所述引物對1的上游引物和所述引物對2的下游引物作為引物對進行PCR擴增得到擴增產物4；以所述擴增產物5和所述擴增產物4的混合物為模板，利用所述引物對1的上游引物和所述引物對3的下游引物作為新引物對進行PCR擴增得到擴增產物6；

(3)以所述S層蛋白(T-8)核酸為模板，利用所述引物對4進行PCR擴增得到擴增產物8；以所述擴增產物6為模板，利用所述引物對1的上游引物和所述引物對3的下游引物作為引物對進行PCR擴增得到擴增產物7；以所述擴增產物7和所述擴增產物8的混合物為模板，利用所述引物對1的上游引物和所述引物對4的下游引物作為新引物對進行PCR擴增得到擴增產物9，所述擴增產物9即為口蹄疫多型表位肽。

4.如權利要求3所述一種口蹄疫多型表位肽，其特征在于，所述擴增產物1和所述擴增產物2的混合摩爾比為1:1；所述擴增產物5和所述擴增產物4的混合摩爾比為1:1；所述擴增產物7和所述擴增產物8的混合摩爾比為1:1。

5.一種疫苗，其特征在于，所述疫苗包含權利要求1-4任一項所述的口蹄疫多型表位肽。

6.權利要求1-4任一項所述的一種口蹄疫多型表位肽在制備預防或治療口蹄疫藥物中的應用。