[發明專利]基于C2c2的腫瘤相關突變基因的gRNA、檢測方法、檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201810874299.1 | 申請日： | 2018-07-25 |
| 公開（公告）號： | CN109295055A | 公開（公告）日： | 2019-02-01 |
| 發明（設計）人： | 陳侃;羅鎮華 | 申請（專利權）人： | 廣州普世利華科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/90;C12N9/22;C12Q1/6827 |
| 代理公司： | 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228 | 代理人： | 張小黎 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市海珠區*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 突變基因 檢測試劑 檢測 腫瘤 靶標 復合物檢測 可檢測信號 準確度 靶向識別 靶向腫瘤 規律間隔 檢測標記 商業應用 系統應用 重復序列 轉錄產物 復合物 靈敏度 人腫瘤 成簇 切割 釋放 | ||
1.一種特異性識別靶核苷酸的gRNA序列，其特征在于，所述的靶核苷酸為腫瘤相關突變基因對應的RNA序列，所述gRNA對應的編碼DNA序列包括表3中SEQ ID NO.1-SEQ IDNO.83所示核苷酸序列中的一條或多條。
2.一種CRISPR-C2c2系統，其特征在于，包括：
1)C2c2效應蛋白；
2)一種或多種核酸，其中，所述一種或多種核酸包含至少一種如權利要求1所述的gRNA序列；
所述C2c2蛋白與gRNA結合形成CRISPR-C2c2復合物，并且當所述CRISPR-C2c2復合物與權利要求1所述的靶核苷酸結合時，所述CRISPR-C2c2復合物對所述靶核苷酸和/或與靶核苷酸相關的序列進行修飾。
3.一種非天然存在的或工程化的組合物，其特征在于，所述組合物包含一個或多個載體，該一個或多個載體包含組分I和組分II：
所述組分I包括第一調節元件，以及與所述第一調節元件可操作地連接的編碼C2c2蛋白的編碼序列；所述組分II包括第二調節元件，以及與所述第二調節元件可操作地連接的編碼gRNA的編碼序列，其中，所述gRNA包含如權利要求1所述的gRNA序列；
其中，組分I和II位于相同或不同載體上；
所述C2c2蛋白與gRNA結合形成CRISPR-C2c2復合物，并且當所述CRISPR-C2c2復合物與權利要求1所述的靶核苷酸結合時，所述CRISPR-C2c2復合物對所述靶核苷酸和/或與靶核苷酸相關的序列進行修飾。
4.一種修飾與權利要求1所述的靶核苷酸相關的序列的方法，其特征在于，所述方法包括遞送包含1)及2)的組合物，使包含1)及2)的組合物與所述靶核苷酸及所述與靶核苷酸相關的序列接近：
1)C2c2效應蛋白；
2)一種或多種核酸，其中，所述一種或多種核酸包含至少一種如權利要求1所述的gRNA序列；
所述C2c2蛋白與gRNA結合形成CRISPR-C2c2復合物，并且當所述CRISPR-C2c2復合物與權利要求1所述的靶核苷酸結合時，所述CRISPR-C2c2復合物對所述靶核苷酸和/或與靶核苷酸相關的序列進行修飾。
5.一種真核宿主細胞，其特征在于，包含組分I和/或組分II：
所述組分I包括第一調節元件，以及與所述第一調節元件可操作地連接的編碼C2c2蛋白的編碼序列；所述組分II包括第二調節元件，以及與所述第二調節元件可操作地連接的編碼gRNA的編碼序列，其中，所述gRNA包含權利要求1所述的gRNA序列；
其中，組分I和II位于相同或不同載體上；
所述C2c2蛋白與gRNA結合形成CRISPR-C2c2復合物，并且當所述CRISPR-C2c2復合物與權利要求1所述的靶核苷酸結合時，所述CRISPR-C2c2復合物對所述靶核苷酸和/或與靶核苷酸相關的序列進行修飾。
6.如權利要求2-5中的任一項，其特征在于，所述的修飾是引入斷裂、切割或標記。
7.一種檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1提供的gRNA序列、權利要求2提供的CRISPR-C2c2系統、權利要求3提供的非天然存在的或工程化的組合物、權利要求5提供的真核宿主細胞中的一種或多種。
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