[發(fā)明專利]一種高白細胞性白血病PDX模型的建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810873359.8
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN109022362B
• 公開（公告）日: 2022-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周芙玲;金艷霞;梁雨星;楊倩;丁路;張冬冬;吳八路;潘運寶
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01K67/027
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 唐萬榮;徐曉琴

本發(fā)明屬于動物模型技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高白細胞性白血病PDX模型的建立方法，具體包括：篩選合適的高白細胞性白血病臨床患者；采用COM.TEC血細胞分離機分離外周血中白細胞；分離純化所采集的外周血中白細胞的單個核細胞并進行細胞培養(yǎng)，得到白血病細胞懸液；制備高白細胞性白血病PDX模型：首先將小鼠用χ?ray放射線輻照，然后將白血病細胞懸液注射至小鼠尾靜脈，一周后通過隨機抽取小鼠尾巴血液進行檢測，根據(jù)檢測結(jié)果判斷模型是否建立成功。本發(fā)明所述高白細胞性白血病PDX模型的建模成功率高，所構(gòu)建的小鼠PDX模型的疾病表現(xiàn)和細胞形態(tài)可以直接反映出高白細胞性白血病細胞的特點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物模型技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高白細胞性白血病PDX模型的建立方法。

背景技術(shù)

白血病為血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，是一類造血干細胞異常的克隆增殖性疾病，預(yù)后差。高白細胞性白血病(Hyperleukocytic Leukemia，HLL)是指外周血白細胞異常增多(≥100×10⁹/L)的高危類型白血病。白細胞異常增高產(chǎn)生白細胞淤滯和血管壁浸潤，特別容易發(fā)生呼吸窘迫綜合征和顱內(nèi)出血，而化療緩解率低，又容易出現(xiàn)腫瘤溶解綜合征。然而，目前對于高白細胞性白血病的相關(guān)研究仍然處于起步階段，我們在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，某些具有高白細胞性白血病的患者病情惡性程度高，易復(fù)發(fā)，放化療效果差，這些寶貴的臨床病例能夠為白血病的科學(xué)研究提供極好的基礎(chǔ)。小鼠是研究白血病的理想動物模型，近年來，有報道將人白血病細胞移植入小鼠體內(nèi)構(gòu)建PDX小鼠模型，但由于細胞數(shù)目少、細胞純度低等缺點，成模率非常低。此外，如果長期培養(yǎng)擴增白血病細胞，容易導(dǎo)致細胞基因及免疫表型變異。因此，目前國內(nèi)外尚無建立高白細胞性白血病PDX模型的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，目的在于提供一種高白細胞性白血病PDX模型的建立方法。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種高白細胞性白血病PDX模型的建立方法，包括如下步驟：

(1)選擇合適的高白細胞性白血病臨床患者；

(2)采用COM.TEC血細胞分離機分離采集步驟(1)所述高白細胞性白血病臨床患者的外周血中白細胞；

(3)分離所采集的外周血中白細胞的單個核細胞，進一步磁珠分選純化單個核細胞，進行細胞培養(yǎng)，獲得白血病細胞懸液；

(4)制備高白細胞性白血病PDX模型：首先將小鼠用χ--ray放射線輻照，然后將步驟(3)培養(yǎng)所得白血病細胞懸液注射至小鼠尾靜脈，一周后通過隨機抽取小鼠尾巴血液進行檢測，根據(jù)檢查結(jié)果判斷模型是否建立成功。

上述方案中，步驟(1)所述高白細胞性白血病臨床患者的標準為：a)年齡18-60歲，白血病患者；b)ECOG行為狀態(tài)評分為0-2分；c)肝腎功能基本正常；d)外周血中白細胞WBC≥100×10⁹cells/ml。

上述方案中，步驟(2)所述血細胞分離機分離采集的主要參數(shù)設(shè)置為：

a)白細胞總數(shù)(WBC)：設(shè)至最大值為120×10E3/UL；

b)每循環(huán)血量(V(Cycle))：第一個循環(huán)設(shè)為180ml；第二個循環(huán)開始：先根據(jù)白細胞總數(shù)按照下列經(jīng)驗值設(shè)定WBC30萬，80-100ml；然后在白膜收集階段時觀察白膜，若此時分離腔內(nèi)有剩余白膜，則下調(diào)“V”，每次下調(diào)10ml，直至觀察不到白膜；反之則上調(diào)“V”，每次上調(diào)10ml，但不超過上限180ml；

c)白膜泵出量(V(Sopillover))：25ml；

d)白膜收集量(V(Buffy Coat))：先設(shè)到10ml，如果收集尾部變淡則減1-2ml，或者按“stop phase”手動控制收集截至點；