[發明專利]一種基于HPLC-MS/MS技術檢測NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法

有效

• 申請號: 201810870942.3
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN108918722B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 林建陽;楊恬;時月;林城江;閻成炟
• 申請（專利權）人: 中國醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽利泰專利商標代理有限公司 21209
• 代理人: 劉蕾施

本發明提供了一種基于HPLC?MS/MS技術檢測NMDA受體拮抗劑JCC?02血藥濃度的方法，涉及藥物分析領域，包括以下步驟：在JCC?02灌胃給藥后的SD大鼠血漿中，依次加入甲醇、乙腈和內標工作溶液，渦旋取上清用流動相溶解后進樣，所述內標工作溶液為格列齊特的甲醇溶液；采用液質聯用技術，乙腈?甲酸水混合溶液為流動相進行梯度洗脫，Venusil ASB C8色譜柱進行色譜分離，二級質譜檢測器檢測，進行定量分析。該方法專屬性強，靈敏度高，樣品取樣量少，預處理簡單、快速，分析周期短，經方法學驗證此方法準確、可靠，適用于SD大鼠血漿中JCC?02的藥物濃度測定和藥代動力學研究。

技術領域

本發明屬于藥物分析領域，尤其是涉及一種基于HPLC-MS/MS技術檢測NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法。

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一種不可逆的神經進行性退變，臨床表現為漸進性記憶障礙、失語、失用、失認、視空間技能損害、執行功能障礙以及人格和行為改變等，近年來其發病率呈逐年上升的趨勢。目前，N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑類治療藥物上市的只有美金剛一種，用于中、重度AD的治療，這對于復雜的臨床需求是遠遠不夠的，因此近年來NMDA受體拮抗劑類治療藥物的研究與開發已成為人們關注的熱點。

根據美金剛的化學結構進行修飾，研制出了新型NMDA受體拮抗劑候選化合物JCC-02，化學結構式見圖1，其初始藥理活性已被證實，但尚未進行臨床前藥代動力學研究。目前，還未發現有關JCC-02生物樣品中藥物濃度定量分析方法和臨床前藥代動力學特征的國內外文獻報道。

因此，建立一種靈敏、準確、快速的痕量定量分析方法，并應用于JCC-02在大鼠體內的藥代動力學研究，將會為今后的藥理、毒理、藥劑學等的研究提供科學依據和數據支持，對新藥的研發也具有積極促進作用。

發明內容

本發明的目的是建立一個操作簡便、快速、準確、血漿用量少的能夠測定SD大鼠灌胃給藥后化合物JCC-02的血藥濃度方法。

發明人經過多次不同條件的實驗結果對比和優化，最終篩選出了本發明的實驗條件。本發明是一種基于HPLC-MS/MS技術檢測NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法，其特征在于，待測樣品預處理后，在混合流動相梯度洗脫下，經高效液相色譜柱分離后，采用二級質譜檢測器檢測，內標法進行定量分析。該實驗條件專屬性強、準確度高、重現性好，可以得到滿意的峰形及色譜保留時間，使分析時間相對較短。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

(1)大鼠血漿樣品的預處理：

采用8周體成熟的SD大鼠，經時經眼眶靜脈叢下取血0.4mL，經高速離心機離心取上清液制成；-70℃深低溫冰箱冷凍保存待測；

在1.5mL離心管中依次加入溶解后待測血漿、內標工作溶液、甲醇(或JCC-02標準溶液)各10μL，渦旋10s，再加入乙腈沉淀劑40μL，渦旋30s后10000r·min^-1離心10min，取上清液20μL于新離心管，加入180μL流動相，渦旋10s，即得；

(2)待測樣品和內標分離：

液相條件是采用Venusil ASB C₈色譜柱(2.1×50mm，3μm)，柱溫：40℃，通用型二元泵(G4220A)和自動進樣器(G4226A)進行色譜分離，流動相為含0.1％甲酸的乙腈-水混合溶液，進行梯度洗脫，洗脫程序見表1，流速為0.3mL·min^-1；

表1洗脫梯度程序

(3)二級質譜檢測