[發(fā)明專利]一種基于HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810870942.3
• 申請(qǐng)日: 2018-08-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108918722B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林建陽(yáng);楊恬;時(shí)月;林城江;閻成炟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 沈陽(yáng)利泰專利商標(biāo)代理有限公司 21209
• 代理人: 劉蕾施

1.一種基于HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法，其特征在于，待測(cè)樣品預(yù)處理后，在混合流動(dòng)相梯度洗脫下，經(jīng)高效液相色譜柱分離后，采用二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析，包括以下步驟：

(1)大鼠血漿樣品的預(yù)處理：

在含有JCC-02的SD大鼠血漿中，依次加入內(nèi)標(biāo)工作溶液、甲醇和乙腈，渦旋后離心，并取上清，加流動(dòng)相即得；

(2)待測(cè)樣品和內(nèi)標(biāo)分離：

采用Venusil ASB C8色譜柱，柱溫：40℃，通用型二元泵和自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行色譜分離；采用含0.1％甲酸的乙腈-水混合溶液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；

(3)二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)

采用Agilent 1290 Infinity高效液相色譜儀，串聯(lián)AB API4000三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀為分析檢測(cè)設(shè)備；質(zhì)譜儀采用電噴霧ESI離子源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)分析模式MRM進(jìn)行正離子檢測(cè)；定量分析的離子分別為：JCC-02：m/z 333.20→162.9，IS：m/z 324.2→110.0，碰撞能量分別為：JCC-02：29eV，IS：31eV；

所述內(nèi)標(biāo)工作溶液為格列齊特的醇溶液，加樣濃度為7μg·mL^-1；

所述流動(dòng)相A為含0.1％甲酸的乙腈溶液；流動(dòng)相B為含0.1％甲酸的水溶液；洗脫方式為梯度洗脫；流速：0.3mL·min^-1；

其中，洗脫梯度程序：

所述質(zhì)譜條件中，干燥氣：N₂；離子源溫度500℃；離子源電壓3500V；氣簾氣：Cur；20psi；霧化氣：GS1；40psi；干燥氣：GS2；40psi。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法，其特征在于，血漿樣品是采用8周體成熟的SD大鼠，血漿樣品量為0.4mL，經(jīng)高速離心機(jī)離心，取上清液制成；取樣量為100μL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法，其特征在于，流動(dòng)相配制方法：將乙腈或100mL水加入100mL容量瓶中，加入100μL甲酸，定容，渦旋混勻后即得。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法，其特征在于，JCC-02系列標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法：精密稱定JCC-02對(duì)照品10mg于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，超聲2min至藥物完全溶解，即得1mg·mL^-1的JCC-02儲(chǔ)備液；再用甲醇將其逐級(jí)稀釋至各所需濃度，即得到各濃度的JCC-02系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法，其特征在于，內(nèi)標(biāo)工作溶液配制方法：精密稱定格列齊特對(duì)照品10mg于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，超聲2min至藥物完全溶解，即得1mg·mL^-1的格列齊特內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；再用甲醇將其稀釋至所需濃度7μg·mL^-1，即得內(nèi)標(biāo)工作溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)NMDA受體拮抗劑JCC-02血藥濃度的方法，其特征在于，血漿樣品上機(jī)檢測(cè)的進(jìn)樣量為2μL。