[發明專利]一種提高堿性蛋白酶發酵活力的生產方法

在審

• 申請號: 201810870244.3
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN108949731A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 孫利鵬;焦國寶;管寧;陳曉宇
• 申請（專利權）人: 河南新仰韶生物微生態有限公司
• 主分類號: C12N9/54
• 分類號: C12N9/54;C12N1/20;C12R1/10
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

1.一種堿性蛋白酶制備用發酵培養基，其特征在于，該培養基用于地衣芽孢桿菌發酵制備堿性蛋白酶用；所述發酵培養基，為液態，以質量百分含量計，發酵培養基中含有：玉米淀粉或可溶性淀粉1.5~3.5%、棉仁蛋白粉0.5~2.5%、磷酸氫二鈉0.1~0.3%、磷酸二氫鉀0.1~0.2%、氯化鈣0.02~0.03%。

2.如權利要求1所述堿性蛋白酶制備用發酵培養基，其特征在于，玉米淀粉2~3%、棉仁蛋白粉1~2%、磷酸氫二鈉0.15~0.25%、磷酸二氫鉀0.1~0.2%、氯化鈣0.02~0.03%。

3.如權利要求2所述堿性蛋白酶制備用發酵培養基，其特征在于，玉米淀粉2.5%、棉仁蛋白粉1.5%、磷酸氫二鈉0.2%、磷酸二氫鉀0.15%、氯化鈣0.025%。

4.利用權利要求1~3任一項所述發酵培養基的提高堿性蛋白酶發酵活力的生產方法，其特征在于，該方法具體包括如下生產步驟：

（1）菌種活化

以地衣芽孢桿菌作為發酵菌株，首先將地衣芽孢桿菌進行菌種復蘇，然后將進行活化菌株；

（2）種子培養

將步驟（1）中復蘇、活化后菌種接入種子培養基中，35~38℃恒溫、180~250r/min轉速搖床培養28~37h，以此作為種子液；

將種子液接種入含有滅菌后一級種子培養基的發酵罐中，35~38℃、210~270 r /min發酵培養20~30h，以此作為一級種子液；

發酵過程中，發酵罐壓保持在0.05~0.08Mpa，發酵液與通氣量比（V/V?min）為1：0.45~0.8；

（3）發酵制備堿性蛋白酶

將步驟（2）中所制備一級種子液接種入發酵培養基，35~38℃、180~210 r /min發酵培養20~30h；再補充補料培養基，同樣條件下繼續發酵培養20~24h；

發酵過程中，發酵罐壓保持在0.05~0.08Mpa，發酵液與通氣量比（V/V?min）為1：0.45~0.8；

所述補料培養基，為玉米糖漿和棉仁蛋白粉的混合物，以質量比計算，玉米糖漿：棉仁蛋白粉=5~8：2~3；

發酵結束后所得即為含有堿性蛋白酶的發酵液。

5.如權利要求4所述提高堿性蛋白酶發酵活力的生產方法，其特征在于，步驟（1）中，所述地衣芽孢桿菌發酵菌株采用中國工業微生物菌種保藏管理中心保藏號為CICC 10266的地衣芽孢桿菌菌株。

6.如權利要求4所述提高堿性蛋白酶發酵活力的生產方法，其特征在于，步驟（2）中，所述種子培養基，為液態，以質量百分比計，培養基中含有：蛋白胨1%、牛肉膏0.5%、氯化鈉1%、葡萄糖2%。

7.如權利要求4所述提高堿性蛋白酶發酵活力的生產方法，其特征在于，步驟（2）中，所述一級種子培養基，以質量百分含量計，培養基組成為：葡萄糖0.5%，玉米淀粉2%，棉仁蛋白粉 1.2%，磷酸二氫鉀0.2%，pH自然。

8.如權利要求4所述提高堿性蛋白酶發酵活力的生產方法，其特征在于，步驟（3）中，將一級種子液接種入發酵培養基后，先發酵培養24h；再補充補料培養基，同樣條件下繼續發酵培養24h；

補料培養基中玉米糖漿用量為發酵培養基中原玉米淀粉或可溶性淀粉用量2倍，棉仁蛋白粉用量為發酵培養基中原棉仁蛋白粉用量2倍。