[發明專利]一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201810868273.6
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN108967833A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 楊培周;姜紹通;鄭志;趙二永;肖偉;吳蕓
• 申請（專利權）人: 合肥工業大學
• 主分類號: A23L5/20
• 分類號: A23L5/20;C12N1/14;C12N9/00;C12R1/645
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑及其制備方法，發酵菌種為黃孢原毛平革菌、污叉絲孔菌、云芝、密黏褶菌的混合菌種，通過固體發酵代謝產生具有脫除黃曲霉毒素功能的復合胞外酶，使用檸檬酸?檸檬酸鈉緩沖液浸泡固體發酵成品，經過壓濾、超濾濃縮、噴霧干燥，得到復合酶制劑產品。本發明綜合四種微生物表達胞外酶的酶學特征，配制固體發酵培養基，誘導發酵，獲得胞外復合酶制劑產品，制備出分解黃曲霉毒素的復合酶制劑產品具有成本較低，安全性好，催化效率較高的特點，可有效分解陳化糧乙醇發酵后的醪液中的黃曲霉毒素，廣泛應用于動物飼料工業和食品工業等領域中的黃曲霉毒素脫除。

技術領域

本發明涉及一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑及其制備方法，屬于食品生物技術領域。

背景技術

黃曲霉毒素（Aflatoxion，AFT）是黃曲霉(Aspergillus flavus)與寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）產生的次級代謝產物，是一類具有二氫呋喃雜氧萘環結構的衍生物的總稱，常見的有AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂、AFM₁、AFM₂、AFB_2a、AFGX、AFBM_2a、AFGM_2a等幾種。這類毒素因含有大環共軛體系，穩定性非常好，分解溫度高達280℃。在各種黃曲霉毒素中，以AFB₁存在最多，致突變性最強，通常所說的AFT即是指AFB₁。在各類食品中AFT污染極其常見，具有較強的致癌性、基因毒性、皮膚毒性、致畸性、腎毒性及肝毒性。在我國，谷物、飼料、食品等黃曲霉毒素的感染狀況較為嚴重，對河南、山東、湖北、安徽4省的調查發現飼料中曲霉菌檢出率為75.5%，而在全國28個省市區的調查，谷物、飼料中共分離鑒定出73種霉菌，其中檢出率最高的是曲霉屬，為100%。

黃曲霉毒素去毒方法包括氨化法、堿法、高溫法、氧化法和吸附法等，這些方法處理不穩定、營養成分破壞較大，降低感官品質，黃曲霉毒素容易恢復毒性，難以規模化生產。生物酶解毒能夠維持被污染物的營養特性，且具有催化條件溫和，作用機制明確，專一性強和轉化效率高的特點。但是對于黃曲霉毒素，目前尚未找到能完全降解該毒素的菌株或物質，且用生物學方法降解黃曲霉毒素的實際生產應用少，鮮有關于生物酶降解黃曲霉毒素的報道。因此，需要高表達與黃曲霉毒素解毒相關酶量，開發出高活性、高純度及復合型的新型解毒酶，是解決黃曲霉毒素污染的重要策略。

通過生物酶處理法對黃曲霉毒素進行脫毒后，不會破壞原有產品的品質，而且可能增加產品的營養價值，具有巨大的應用潛力，但是，目前現有的生物去毒法技術采用酶成分較單一，黃曲霉毒素屬于脂溶性，屬于水溶性的單一黃曲霉毒素分解酶與黃曲霉毒素結合效率低；單一黃曲霉毒素分解酶的作用機制雖明確，但是黃曲霉毒素分解酶在處理過程中容易被體系中物質吸附，損耗大，且分離純化黃曲霉毒素分解酶的難度大，成本高，難以規模化實際生產。

發明內容

本發明目的在于提供一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑及其制備方法。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案是：一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，包括下列步驟：

第一步：在無菌環境中，挑取保藏狀態下的黃孢原毛平革菌、污叉絲孔菌、云芝、密黏褶菌，分別接種于種子培養基，然后在溫度28-32℃、轉速150-280rpm的條件下，培養30-60h，獲得黃孢原毛平革菌基礎菌種、污叉絲孔菌基礎菌種、云芝基礎菌種和密黏褶菌基礎菌種；

第二步：在無菌環境中，將所述黃孢原毛平革菌基礎菌種、污叉絲孔菌基礎菌種、云芝基礎菌種和密黏褶菌基礎菌種，按體積比1：20-30分別轉接到新的種子培養基，在溫度28-32℃、轉速150-280rpm的條件下，培養30-50h，獲得黃孢原毛平革菌發酵菌種、污叉絲孔菌發酵菌種、云芝發酵菌種、密黏褶菌發酵菌種；