[發明專利]一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201810868273.6
• 申請日: 2018-08-02
• 公開（公告）號: CN108967833A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 楊培周;姜紹通;鄭志;趙二永;肖偉;吳蕓
• 申請（專利權）人: 合肥工業大學
• 主分類號: A23L5/20
• 分類號: A23L5/20;C12N1/14;C12N9/00;C12R1/645
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

1.一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，其特征在于：包括下列步驟：

第一步：在無菌環境中，挑取保藏狀態下的黃孢原毛平革菌、污叉絲孔菌、云芝、密黏褶菌，分別接種于種子培養基，然后在溫度28-32℃、轉速150-280rpm的條件下，培養30-60h，獲得黃孢原毛平革菌基礎菌種、污叉絲孔菌基礎菌種、云芝基礎菌種和密黏褶菌基礎菌種；

第二步：在無菌環境中，將所述黃孢原毛平革菌基礎菌種、污叉絲孔菌基礎菌種、云芝基礎菌種和密黏褶菌基礎菌種，按體積比1：20-30分別轉接到新的種子培養基，在溫度28-32℃、轉速150-280rpm的條件下，培養30-50h，獲得黃孢原毛平革菌發酵菌種、污叉絲孔菌發酵菌種、云芝發酵菌種、密黏褶菌發酵菌種；

第三步：在無菌環境中，將所述黃孢原毛平革菌發酵菌種、污叉絲孔菌發酵菌種、云芝發酵菌種、密黏褶菌發酵菌種，按體積比100：20-30：10-15：10-20進行混合，獲得混合發酵菌種；

第四步：將所述混合發酵菌種接種到固體發酵培養基上，然后在相對濕度50-90%、溫度28-37℃環境中，發酵24-48h，接著保持環境條件不變，翻堆一次，繼續發酵24-48h，獲得發酵成品；

第五步：將所述發酵成品與pH值為3-6.6的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液按照體積比1：1-2.8 混合后，過濾得到濾液；

第六步：對第五步所得濾液進行超濾濃縮得到濃縮液；

第七步：對第六步所得濃縮液進行噴霧干燥，得到的粉末即為用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑產品。

2.根據權利要求1所述的用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，其特征在于：所述固體發酵培養基的制備方法包括下列步驟：

（1）將椴木粉碎成直徑1-10 mm的顆粒，在自然干燥條件下放置1-3年，獲得椴木粉；

（2）將椴木粉、麩皮、草木灰、長度為1-5mm的玉米秸稈粉、幾丁質、纖維二糖、殼聚糖按照質量比100: 1-15: 0.01-1:1-10:0.5-2:0.5-1:1-2混合均勻，獲得混合基質；

（3）將鹽溶液與混合基質按照體積質量比1：0.5-3進行混合，滅菌后得到固體發酵培養基；所述鹽溶液由10-20克的硫酸銨、10~30克的磷酸氫二鉀和0. 5-1克的硫酸錳溶于1升水中制得。

3.根據權利要求1所述的用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，其特征在于：所述種子培養基的制備方法包括下列步驟：

（1）將椴木粉碎成直徑1-10 mm的顆粒，在自然干燥條件下放置1-3年，獲得椴木粉；

（2）將椴木粉與質量分數為0.05-0.1%的氫氧化鈉溶液按照質量體積比1：50-100的比例混合，20-35℃條件下浸泡12-24小時，然后過濾收集濾液，接著調節pH值至6-8，獲得發酵誘導液；

（3）向每升所述發酵誘導液中添加10-20克的磷酸氫二鉀、1-10克的氯化鈉、0.1-1克的硫酸錳、10-20克的酵母粉，滅菌后即得種子培養基。

4.根據權利要求1所述的用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，其特征在于：在第四步中，混合發酵菌種的接種量為固體發酵培養基的質量的5-15%。

5.根據權利要求1所述的用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，其特征在于：在第五步中，采用板框壓濾機壓濾，板框壓濾機中滌綸長纖濾布的型號為60-10（240），操作壓力0.5-1.0MPa。

6.根據權利要求1所述的用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，其特征在于：在第六步中，超濾濃縮采用的超濾膜為改性聚砜超濾膜，孔徑40-60μm，孔密度6×10⁹-7×10⁹孔/cm²，皮層厚度為6-10μm，支撐層厚度為80-100μm。

7.根據權利要求1所述的用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑的制備方法，其特征在于：在第七步中，噴霧干燥的進風溫度為165-170℃，排風溫度為80-85℃，收集器內溫度為45-48℃，霧化器轉速為15000-17000 rpm。

8.一種用于脫除黃曲霉毒素的復合酶制劑，其特征在于：采用權利要求1~7任一權利要求所述的制備方法制得。