[發明專利]一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法

在審

• 申請號: 201810866703.0
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN109097325A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 丁彬彬
• 申請（專利權）人: 丁彬彬
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A01N1/02;A61K8/99;A61K8/64;A61Q19/02;A61Q19/08
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 武媛;呂學文

本發明涉及一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，屬于醫學美容技術領域，包括以下步驟：步驟一，獲取脂肪干細胞；步驟二，傳代培養；步驟三，低溫冷凍；步驟四，脂肪干細胞液的制備。該脂肪干細胞液的制備方法操作簡便，生產技術要求不高，適用于大規模生產細胞液產品，能夠在生物技術生產車間大規模長時間開展生產過程，制造成本較低，且產品功效很好，并且通過低溫冷凍步驟可以延長脂肪干細胞液的保存時間，在需要使用時解除冷凍狀態即可，市場前景廣闊。

技術領域

本發明涉及一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，屬于醫學美容技術領域。

背景技術

在人類預期壽命不斷延長，人口日益老齡化的現代社會，衰老與長壽問題倍受各方面的關注，減緩皮膚的衰老已經漸漸成為人們追求的目標。人體的衰老，皺紋的出現，究其根源實質上都是細胞的衰老和減少。而細胞的衰老和減少則是由干細胞老化引起的。

脂肪干細胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)、ADSC多能細胞是近年來從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞。主要恢復組織細胞的修復功能，促進細胞的再生，恢復年輕面容的同時，身體機能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內而外真正的有效抵抗衰老。

同時研究表明干細胞生長因子可以快速激活休眠的干細胞并促使其生長，同時可以調節機體內微環境，為干細胞提供有利的生長條件。生長因子多為廣義的肽激素，有表皮生長因子、成纖細胞生長因子、血小板來源增殖因子等。有研究表明該類生長因子在美容方面功能強大，能對受損皮膚、敏感皮膚、創傷皮膚以及改建性皮膚具有良好的修復、護理，縮短創傷愈合時間以及減少疤痕形成，再生血管，促進膠原蛋白合成，延緩衰老等。

現有的美容保養品，大都通過化工方法制得，其產品中的有害物質殘留較多，長期使用會對皮膚產生不利影響。而且現有產品大都不具有生物活性物質，不能夠有效促進表皮細胞的新陳代謝，改善皮膚的光澤。而且，化工護膚品中含有的部分物質會對人體產生過敏反應，不適合全體人群使用。因此研發一種對皮膚友好，并且能減緩皮膚衰老的皮膚保養產品，具有重要意義。

發明內容

為解決現有技術中存在的問題，本發明實施例提供了一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，通過脂肪干細胞培養得到細胞液產品，其中的低溫冷凍步驟能能夠延長保存時間，利用脂肪干細胞分泌各種生長因子，促進皮膚創面再生愈合。具體技術方案如下：

一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，包括以下步驟：

步驟一，獲取脂肪干細胞，獲取脂肪組織，用D-Hanks緩沖液清洗，去除殘留的血液和組織碎片，將脂肪組織剪成小脂肪塊，把脂肪組織加入消化液，放入37℃恒溫震蕩箱中消化20min～60min，然后靜置待其分層后，吸取上層脂肪細胞液，移入含有胎牛血清的DMEM培養基中，密封離心分離，去除上清液，再次加入適量含有胎牛血清的DMEM培養基，吹打細胞制成脂肪干細胞懸液，接種到培養瓶中，在37℃溫度條件下， 5％CO₂恒溫培養，定期更換培養基直到脂肪干細胞鋪滿培養瓶底部；

步驟二，傳代培養，將步驟一得到的脂肪干細胞從培養基中取出，加入D-Hanks緩沖液清洗干凈，然后加入酶液消化處理，在脂肪干細胞長到80％～90％融合后傳代培養；

步驟三，低溫冷凍，將步驟二取出的脂肪干細胞用D-Hanks緩沖液清洗，加入酶液消化1min～3min，按照脂肪干細胞、DMEM培養液、低溫保護劑三者的體積百分比2～4:2～4:1進行混合，先緩慢降至0℃后放入低溫冷凍裝置中冷凍儲存制作冷凍干細胞液；

步驟四，脂肪干細胞液的制備，將步驟三的混合液從低溫冷凍裝置中取出，放入37℃恒溫水浴中解凍，解凍過程中緩慢加入細胞生長因子和D-Hanks緩沖液，制成脂肪干細胞液。