[發明專利]一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法

在審

• 申請號: 201810866703.0
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN109097325A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 丁彬彬
• 申請（專利權）人: 丁彬彬
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A01N1/02;A61K8/99;A61K8/64;A61Q19/02;A61Q19/08
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 武媛;呂學文

1.一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一，獲取脂肪干細胞，獲取脂肪組織，用D-Hanks緩沖液清洗，去除殘留的血液和組織碎片，將脂肪組織剪成小脂肪塊，把脂肪組織加入消化液，放入37℃恒溫震蕩箱中消化20min～60min，然后靜置待其分層后，吸取上層脂肪細胞液，移入含有胎牛血清的DMEM培養基中，密封離心分離，去除上清液，再次加入適量含有胎牛血清的DMEM培養基，吹打細胞制成脂肪干細胞懸液，接種到培養瓶中，在37℃溫度條件下，5％CO₂恒溫培養，定期更換培養基直到脂肪干細胞鋪滿培養瓶底部；

步驟二，傳代培養，將步驟一得到的脂肪干細胞從培養基中取出，加入D-Hanks緩沖液清洗干凈，然后加入酶液消化處理，在脂肪干細胞長到80％～90％融合后傳代培養；

步驟三，低溫冷凍，將步驟二取出的脂肪干細胞用D-Hanks緩沖液清洗，加入酶液消化1min～3min，按照脂肪干細胞、DMEM培養液、低溫保護劑三者的體積百分比2～4:2～4:1進行混合，先緩慢降至0℃后放入低溫冷凍裝置中冷凍儲存制作冷凍干細胞液；

步驟四，脂肪干細胞液的制備，將步驟三的混合液從低溫冷凍裝置中取出，放入37℃恒溫水浴中解凍，解凍過程中緩慢加入細胞生長因子和D-Hanks緩沖液，制成脂肪干細胞液。

2.如權利要求1所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟一中，消化液為胰酶和Ⅰ型膠原酶按照體積比1:1混合而成，其中胰酶的質量分數為0.25％，Ⅰ型膠原酶的質量分數為0.1％。

3.如權利要求1所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟一中，離心分離的速度為800rpm～1800rpm，離心時間為5min～15min。

4.如權利要求1所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟二中，酶液為質量分數為0.25％的胰酶。

5.如權利要求1所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟二中，脂肪干細胞生長的代數為四代或六代。

6.如權利要求1所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟三中，低溫保護劑為甘油。

7.如權利要求1所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟三中，低溫冷凍裝置的冷凍溫度為-40℃～-80℃。

8.如權利要求1所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟四中，細胞生長因子包括表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、角質細胞生長因子、神經生長因子、肝細胞生長因子、轉化生長因子-α、血管內皮細胞生長因子中的一種或多種。

9.如權利要求8所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟四中，細胞生長因子首先與D-Hanks緩沖液混合。

10.如權利要求9所述的一種用于美容保養的脂肪干細胞液的制備方法，其特征在于，在步驟四中，細胞生長因子與D-Hanks緩沖液的加入量為：每500ml冷凍干細胞液中加入細胞因子5mg～20mg和D-Hanks緩沖液500ml～1000ml。