[發明專利]一種快速檢測β-淀粉樣蛋白的量子點免疫層析試紙條與應用

在審

• 申請號: 201810865711.3
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN109187981A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 萬東山;郭蘭英
• 申請（專利權）人: 萬東山
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58;G01N33/532
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 許菲菲

1.一種快速檢測β-淀粉樣蛋白的量子點免疫層析試紙條，其特征在于包含設有檢測區和質控區的硝酸纖維素膜、包被量子點微球偶聯Aβ40和Aβ42多克隆抗體的玻璃纖維膜；

所述的設有檢測區和質控區的硝酸纖維素膜依次設有Aβ40單克隆抗體、Aβ42單克隆抗體和DNP抗體，形成檢測區T1、檢測區T2和質控區C。

2.根據權利要求1所述的快速檢測β-淀粉樣蛋白的量子點免疫層析試紙條，其特征在于：

所述的檢測區T1和檢測區T2之間的間距為0.5cm；

所述的檢測區T2和質控區C之間的間距為0.5cm。

3.根據權利要求1所述的快速檢測β-淀粉樣蛋白的量子點免疫層析試紙條，其特征在于：

所述的設有檢測區和質控區的硝酸纖維素膜的制備方法，包含如下步驟：

(1)將Aβ40單克隆抗體、Aβ42單克隆抗體用含有海藻糖的磷酸鹽緩沖液分別稀釋至濃度為1.0～2.5mg/mL，DNP抗體稀釋至濃度為0.75～2.5mg/mL，得到β40單克隆抗體工作液、Aβ42單克隆抗體工作液和DNP抗體工作液；

(2)將步驟(1)制得的β40單克隆抗體工作液、Aβ42單克隆抗體工作液和DNP抗體工作液分別在硝酸纖維素膜上劃膜，形成檢測區T1、檢測區T2和質控區C，干燥，得到設有檢測區和質控區的硝酸纖維素膜。

4.根據權利要求3所述的快速檢測β-淀粉樣蛋白的量子點免疫層析試紙條，其特征在于：

步驟(1)中所述的含有海藻糖的磷酸鹽緩沖液為含有質量分數為1％海藻糖的0.01M磷酸鹽緩沖液，pH7.5～8.5。

5.根據權利要求1所述的快速檢測β-淀粉樣蛋白的量子點免疫層析試紙條，其特征在于：

所述的包被量子點微球偶聯Aβ40和Aβ42多克隆抗體的玻璃纖維膜的制備方法，包含如下步驟：

(1)QD₆₅₅量子點微球標記Aβ40多克隆抗體、QD₅₆₅量子點微球標記Aβ42多克隆抗體

將QD₆₅₅量子點微球、QD₅₆₅量子點微球分別用活化緩沖液洗滌并稀釋，得到QD₆₅₅量子點微球溶液、QD₅₆₅量子點微球溶液；將1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與QD₆₅₅量子點微球溶液、QD₅₆₅量子點微球溶液分別混合，25℃±0.1℃振蕩30～60min，離心，棄上清，然后用偶聯液洗滌，得到洗滌后的QD₆₅₅量子點微球、QD₅₆₅量子點微球；然后按照每毫克量子點微球加入10μg抗體蛋白的配比，在洗滌后的QD₆₅₅量子點微球、QD₅₆₅量子點微球中分別加入Aβ40多克隆抗體、Aβ42多克隆抗體，2～8℃振蕩18～24h；加入封閉液25℃±0.1℃振蕩60～120min，離心，棄上清，然后用保存液洗滌并稀釋，分別得到QD₆₅₅量子點微球標記的Aβ40多克隆抗體、QD₅₆₅量子點微球標記的Aβ42多克隆抗體；

(2)QD₆₅₅量子點微球或QD₅₆₅量子點微球標記DNP-BSA

將QD₆₅₅量子點微球或QD₅₆₅量子點微球用活化緩沖液洗滌并稀釋，得到QD₆₅₅量子點微球溶液或QD₅₆₅量子點微球溶液；將1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與QD₆₅₅量子點微球溶液或QD₅₆₅量子點微球溶液混合，25℃±0.1℃振蕩30～60min，離心，棄上清，然后用偶聯液洗滌，得到洗滌后的QD₆₅₅量子點微球或QD₅₆₅量子點微球；然后按照每毫克量子點微球加入10μg蛋白的配比，在洗滌后的QD₆₅₅量子點微球或QD₅₆₅量子點微球中加入DNP-BSA，2～8℃振蕩18～24h；加入封閉液25℃±0.1℃振蕩60～120min，離心，棄上清，然后用保存液洗滌并稀釋，得到QD₆₅₅量子點微球標記的DNP-BSA或QD₅₆₅量子點微球標記的DNP-BSA；

(3)將步驟(1)制得的QD₆₅₅量子點微球標記的Aβ40多克隆抗體、QD₅₆₅量子點微球標記的Aβ42多克隆抗體和步驟(2)制得的QD₆₅₅量子點微球標記的DNP-BSA或QD₅₆₅量子點微球標記的DNP-BSA等體積混合，得到混合物；將混合物涂覆在玻璃纖維膜上，干燥，得到包被量子點微球偶聯Aβ40和Aβ42多克隆抗體的玻璃纖維膜。