[發明專利]用于治療“女運動員三聯征”和修復女運動員卵巢功能的細胞制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201810862472.6
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN109010368B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 徐妍;王海亞;郭世磊
• 申請（專利權）人: 徐妍
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/10;A61P1/14;A61P15/00;A61P5/02;A61P19/10;A61P15/08;C12N5/0775
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

1.一種用于治療“女運動員三聯征”和修復女運動員卵巢功能的細胞制劑，其特征在于，所述的細胞制劑由被rhSDF-1α和IGF-II充分馴化的間充質干細胞，以及用于承載間充質干細胞的生理鹽水組成，所述的間充質干細胞為臍帶間充質干細胞或胎盤間充質干細胞；所述的rhSDF-1α的質量濃度為10-150ng/mL；所述的IGF-II的質量濃度為200ng/ml。

2.根據權利要求1所述的細胞制劑，其特征在于：所述的rhSDF-1α的質量濃度為100ng/mL。

3.根據權利要求1所述的細胞制劑，其特征在于：所述的間充質干細胞的來源為人臍帶或胎盤；所述的細胞制劑中，間充質干細胞的濃度為5×10⁶～2×10⁸個/100mL生理鹽水。

4.根據權利要求1所述的細胞制劑，其特征在于，所述的間充質干細胞為原代-第10代的間充質干細胞。

5.根據權利要求1所述的細胞制劑，其特征在于，所述的細胞制劑為混懸液。

6.如權利要求1-5任意一項所述的細胞制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備臍帶或胎盤間充質干細胞；

2)制備被rhSDF-1α和IGF-II充分馴化的間充質干細胞：將rhSDF-1α、IGF-II加入上述臍帶或胎盤間充質干細胞的培養基中進行馴化，其中，rhSDF-1α的質量濃度為10-150ng/mL；所述的IGF-II的質量濃度為200ng/ml；

3）收集生長狀況良好，生長密度為90%的細胞；將細胞通過胰酶進行消化，待細胞懸浮后加入帶有10%FBS的培養基終止消化；將懸浮的細胞收集后置于離心機中，1000轉/6分鐘進行離心，并重復離心清洗；收集離心管底部的細胞，計數后加入生理鹽水中待進行靜脈注射。

7.根據權利要求6所述的細胞制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟2）中，rhSDF-1α的質量濃度為100ng/mL。

8.根據權利要求6所述的細胞制劑的制備方法，其特征在于，所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，包括如下步驟：

1)取志愿、健康合格孕婦的足月剖宮產的新生兒臍帶，充分洗滌去除雜質；

2)將臍帶組織剪成塊狀，加入膠原酶消化液，37℃恒溫搖床中振蕩消化，完全培養基DMEM和10％胎牛血清FBS終止消化；

3)50目篩網過濾人臍帶組織消化后的產物；

4)將收集的過濾液離心、分離獲得單個核細胞；

5)將離心后獲得單個核細胞重懸于完全培養基DMEM+5％FBS，并加入rhSDF-1α、IGF-II，接種于培養皿中，在37℃，體積分數為5％CO₂培養箱中培養；

6)待細胞生長至80-90％融合度時，用胰酶消化進行傳代培養，即得臍帶間充質干細胞；必要時進行凍存待用。

9.根據權利要求6所述的細胞制劑的制備方法，其特征在于，所述的胎盤間充質干細胞的制備方法，包括如下步驟：

1)取志愿、健康合格孕婦的足月剖宮產胎兒的胎盤，PBS反復沖洗去除胎盤血；

2)將胎盤組織剪成塊狀，加入膠原酶消化液，37℃恒溫搖床中振蕩消化，完全培養基DMEM+10％FBS，終止消化；

3)50目篩網過濾人胎盤組織消化后的產物；

4)將收集的過濾液離心、分離獲得單個核細胞；

5)將離心后獲得單個核細胞重懸于完全培養基DMEM+5％FBS 并加入rhSDF-1α、IGF-II，接種于培養皿中，在37℃，體積分數為5％CO₂培養箱中培養；

6)待細胞生長至80-90％融合度時，用胰酶消化進行傳代培養，即得胎盤間充質干細胞；必要時進行凍存待用。

10.如權利要求1-5任意一項所述的細胞制劑在制備治療“女運動員三聯征”和修復女運動員卵巢功能藥物中的用途。