[發明專利]一種培育高耐熱性白僵菌菌株的方法

在審

• 申請號: 201810861930.4
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN108624515A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 王定鋒;李良德;吳光遠
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院茶葉研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢

本發明具體涉及一種培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，通過模擬白僵菌自然生活特性，即可寄生生活和腐生生活，通過逐漸的提高人工氣候箱溫度，對白僵菌進行高溫馴化，挑取白僵菌所感染的象甲蟲尸，并進行分離、純化，以便獲得高耐熱性的白僵菌菌株。

技術領域

本發明涉及農作物害蟲生物防治技術領域，具體涉及一種培育高耐熱性白僵菌菌株的方法。

背景技術

球孢白僵菌(以下簡稱白僵菌)屬絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科，是一類廣譜性的昆蟲病原真菌。據報道，白僵菌可寄生15目149科700多種昆蟲和蜱螨類，在農林害蟲防治發揮重要作用。盡管如此，白僵菌在實際應用中穩定性和生態適應性仍難盡如人意。高溫是影響絲孢類真菌殺蟲劑有效應用的關鍵自然環境因素之一。高溫不僅影響昆蟲病原真菌孢子的萌發、菌絲生長和侵染毒力，而且還影響其產品的貨架期。雖然通過改良真菌殺蟲劑劑型可以在一定程度上提高產品的耐熱性，但是菌株本身的抗逆性能在很大程度上決定著菌劑的生態適應性和田間應用效果。大量研究發現不同地域來源的同一菌種的不同菌株在抗逆性能方面往往存在較大的差異。來源于赤道附近(高溫地區)的菌株往往比來源于高緯度區域(低溫地區)的菌株具有更強的耐熱性。

在自然條件下，白僵菌既可營寄生生活，也可以營腐生生活。即遇到適宜的寄主昆蟲時進行寄生，否則也可以生長在富有腐殖質的土壤中。土壤被認為是昆蟲病原真菌的良好棲息地，它能對引起使昆蟲病原真菌損傷的極端非生物脅迫(高溫、低溫和紫外線輻射等)起到緩沖作用。

茶樹是一種多年生的經濟作物，其在生長過程中常遭受多種害蟲的取食為害。其中茶樹食葉性象甲就是一類取食茶樹芽葉的重要害蟲(如茶麗紋象甲、茶大灰象甲和茶綠鱗象甲等)，該類象甲廣泛分布于我國各主要產茶區，并在局部的茶園常爆發成災。該類象甲一年發生一代，卵、若蟲和蛹均在土壤里生活，靠取食土壤腐殖質或茶樹根系為生；其成蟲出土后善于攀爬，通過咬食茶樹的葉片，造成缺刻或孔洞，嚴重影響茶葉的產量和品質。

在田間實際應用白僵菌防治茶樹食葉性象甲時，夏季高溫嚴重抑制白僵菌對食葉性象甲的防治效果。如何有效獲取高耐熱性的白僵菌菌株來滿足茶樹食葉性象甲生物防治的需求，是當前亟待解決的問題。因此，急需建立一種可培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，以便獲得能滿足夏季高溫條件下能有效控制食葉性象甲的高耐熱性白僵菌菌株。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種培育高耐熱性白僵菌菌株的方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，包括如下步驟：

步驟一、選擇土壤經過無菌處理的茶樹盆栽苗；

步驟二、將白僵菌原始菌株配制成孢懸液后接種到步驟一所得的茶樹盆栽苗的根際土壤，并使根際土壤與外界隔離；

步驟三、將步驟二所得的茶樹盆栽苗置于人工氣候箱中，所述人工氣候箱的溫度從26℃開始，每個月提升1-2℃，提升至40℃后保持溫度不變，同時保持濕度在75-90％；

步驟四、在步驟三中的根際土壤中引入象甲并進行飼養，在象甲進行產卵后，不再飼養象甲，象甲死后的蟲尸也留在根際土壤中；

步驟五、待步驟四中卵發育為象甲成蟲出土后，收集象甲成蟲，使用無菌飼養杯進行保濕培養；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲蟲尸，繼續保濕培養，從象甲蟲尸中分離出白僵菌菌株。

進一步的，所述培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，所述步驟二具體為：將白僵菌原始菌株配制成孢懸液后，通過孢懸液去感染象甲，并將象甲安置在步驟一中的茶樹盆栽苗的根際土壤周圍，同時使象甲在根際土壤周圍死亡，并使根際土壤與外界隔離；將根際土壤帶菌的茶樹盆栽苗放置40-60天后，通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況。