[發明專利]一種培育高耐熱性白僵菌菌株的方法在審
| 申請號： | 201810861930.4 | 申請日： | 2018-08-01 |
| 公開（公告）號： | CN108624515A | 公開（公告）日： | 2018-10-09 |
| 發明（設計）人： | 王定鋒;李良德;吳光遠 | 申請（專利權）人： | 福建省農業科學院茶葉研究所 |
| 主分類號： | C12N1/14 | 分類號： | C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214 | 代理人： | 林志崢 |
| 地址： | 355015*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 白僵菌 高耐熱性 菌株 人工氣候箱 高溫馴化 自然生活 寄生 培育 感染 | ||
1.一種培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一、選擇土壤經過無菌處理的茶樹盆栽苗；
步驟二、將白僵菌原始菌株配制成孢懸液后接種到步驟一所得的茶樹盆栽苗的根際土壤，并使根際土壤與外界隔離；
步驟三、將步驟二所得的茶樹盆栽苗置于人工氣候箱中，所述人工氣候箱的溫度從26℃開始，每個月提升1-2℃，提升至40℃后保持溫度不變，同時保持濕度在75-90％；
步驟四、在步驟三中的根際土壤中引入象甲并進行飼養，在象甲進行產卵后，不再飼養象甲，象甲死后的蟲尸也留在根際土壤中；
步驟五、待步驟四中卵發育為象甲成蟲出土后，收集象甲成蟲，使用無菌飼養杯進行保濕培養；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲蟲尸，繼續保濕培養，從象甲蟲尸中分離出白僵菌菌株。
2.根據權利要求1所述的培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步驟二具體為：將白僵菌原始菌株配制成孢懸液后，通過孢懸液去感染象甲，并將象甲安置在步驟一中的茶樹盆栽苗的根際土壤周圍，同時使象甲在根際土壤周圍死亡，并使根際土壤與外界隔離；將根際土壤帶菌的茶樹盆栽苗放置40-60天后，通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況。
3.根據權利要求1所述的培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步驟二具體為：將白僵菌原始菌株配制成孢懸液后，噴灑在步驟一中的茶樹盆栽苗的根際土壤周圍，并使根際土壤與外界隔離；將根際土壤帶菌的茶樹盆栽苗放置40-60天后，通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況。
4.根據權利要求1所述的培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步驟三具體為：將步驟二所得的茶樹盆栽苗置于人工氣候箱中，所述人工氣候箱的溫度從26℃開始，每個月提升1-2℃，并且每個月通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況；提升至40℃后保持溫度不變，同時保持濕度在75-90％，并且每個月再通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況，待處于40℃下的白僵菌于根際土壤中穩定定殖后再進行下一步步驟。
5.根據權利要求1所述的培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述步驟四具體為：在步驟三中的根際土壤中引入象甲并進行飼養，所述象甲用茶樹的新鮮茶梢飼養，待象甲在步驟三中的根際土壤中進行產卵后，不再飼養象甲，象甲死后的蟲尸也留在根際土壤中。
6.根據權利要求1-4任意一項所述的培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，所述茶樹盆栽苗通過水肥管理，保證正常生長。
7.根據權利要求1所述的培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一、選擇土壤經過無菌處理的茶樹盆栽苗；
步驟二、將白僵菌原始菌株配制成孢懸液后，通過孢懸液去感染象甲，并將象甲安置在步驟一中的茶樹盆栽苗的根際土壤周圍，同時使象甲在根際土壤周圍死亡，并使根際土壤與外界隔離；將根際土壤帶菌的茶樹盆栽苗放置40-60天后，通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況；
步驟三、將步驟二所得的茶樹盆栽苗置于人工氣候箱中，所述人工氣候箱的溫度從26℃開始，每個月提升1-2℃，并且每個月通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況；提升至40℃后保持溫度不變，同時保持濕度在75-90％，并且每個月再通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況，待處于40℃下的白僵菌于根際土壤中穩定定殖后再進行下一步步驟；
步驟四、在步驟三中的根際土壤中引入象甲并進行飼養，所述象甲用茶樹的新鮮茶梢飼養，待象甲在步驟三中的根際土壤中進行產卵后，不再飼養象甲，象甲死后的蟲尸也留在根際土壤中；
步驟五、待步驟四中卵發育為象甲成蟲出土后，收集象甲成蟲，使用無菌飼養杯進行保濕培養；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲蟲尸，繼續保濕培養，從象甲蟲尸中分離出白僵菌菌株。
8.根據權利要求1所述的培育高耐熱性白僵菌菌株的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一、選擇土壤經過無菌處理的茶樹盆栽苗；
步驟二、將白僵菌原始菌株配制成孢懸液后，噴灑在步驟一中的茶樹盆栽苗的根際土壤周圍，并使根際土壤與外界隔離；將根際土壤帶菌后的茶樹盆栽苗放置40-60天后，通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況；
步驟三、將步驟二所得的茶樹盆栽苗置于人工氣候箱中，所述人工氣候箱的溫度從26℃開始，每個月提升1-2℃，并且每個月通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況；提升至40℃后保持溫度不變，同時保持濕度在75-90％，并且每個月再通過選擇性培養基檢測根際土壤中白僵菌的存活定殖情況，待處于40℃下的白僵菌于根際土壤中穩定定殖后再進行下一步步驟；
步驟四、在步驟三中的根際土壤中引入象甲并進行飼養，所述象甲用茶樹的新鮮茶梢飼養，待象甲在步驟三中的根際土壤中進行產卵后，不再飼養象甲，象甲死后的蟲尸也留在根際土壤中；
步驟五、待步驟四中卵發育為象甲成蟲出土后，收集象甲成蟲，使用無菌飼養杯進行保濕培養；挑取其中被白僵菌所感染致死的象甲蟲尸，繼續保濕培養，從象甲蟲尸中分離出白僵菌菌株。
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