[發(fā)明專利]一種提高分枝桿菌輔酶再生同時(shí)促進(jìn)雄烯二酮生產(chǎn)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810861279.0
• 申請(qǐng)日: 2018-08-01
• 公開（公告）號(hào): CN108913643A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 申雁冰;王敏;蘇立秋;夏夢(mèng)雷;駱健美;商志華;許雙平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/74;C12N15/53;C12P33/02;C12R1/32
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.甾醇C27單加氧酶基因cyp125-3在提高新金分枝桿菌中雄烯二酮產(chǎn)量中的應(yīng)用，其特征在于，通過(guò)在新金分枝桿菌中過(guò)表達(dá)cyp125-3基因?qū)崿F(xiàn)。

2.一種產(chǎn)雄烯二酮的基因工程菌，其特征在于，是以新金分枝桿菌為宿主細(xì)胞，過(guò)表達(dá)甾醇C27單加氧酶基因cyp125-3獲得的。

3.權(quán)利要求2所述的一種產(chǎn)雄烯二酮的基因工程菌，其特征在于，所述新金分枝桿菌具體為新金分枝桿菌(Mycobacterium sp.)MNR M3，編號(hào)CICC 21097。

4.權(quán)利要求2所述的一種產(chǎn)雄烯二酮的基因工程菌，其特征在于，表達(dá)載體為質(zhì)粒pMV306。

5.權(quán)利要求2-4任意一項(xiàng)所述產(chǎn)雄烯二酮的基因工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，具體如下：

(1)將cyp125-3基因和表達(dá)質(zhì)粒pMV261通過(guò)酶切，連接，構(gòu)建pMV261-cyp125-3重組質(zhì)粒；

(2)將重組質(zhì)粒pMV261-cyp125-3及質(zhì)粒pMV306進(jìn)行酶切，回收pMV261-cyp125-3中的啟動(dòng)子和目的基因片段，與酶切后的pMV306連接，構(gòu)建pMV306-cyp125-3重組質(zhì)粒；

(3)將重組質(zhì)粒pMV306-cyp125-3導(dǎo)入新金分枝桿菌的感受態(tài)細(xì)胞中，獲得的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。

6.權(quán)利要求2-4任意一項(xiàng)所述產(chǎn)雄烯二酮的基因工程菌的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，利用所述基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)雄烯二酮的方法，具體如下：

將菌種經(jīng)種子培養(yǎng)后，按5-10％的接種量接種入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28-32℃，130-250r/min，pH6.5-7.8條件下，發(fā)酵4-6天；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下：K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，檸檬酸鐵銨0.05g/L，檸檬酸2g/L，磷酸氫二銨3.5g/L，葡萄糖10g/L，羥丙基β-環(huán)糊精25mM，植物甾醇3g/L，其余為水，pH6.5-7.8。

8.權(quán)利要求1或2所述的cyp125-3基因，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ IDNO.1所示。