[發明專利]一種基于Au@Ag核殼結構比色檢測卡那霉素的方法

有效

• 申請號: 201810859910.3
• 申請日: 2018-08-01
• 公開（公告）號: CN109115711B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 朱穎越;姜峰;顧翔源;金夢依;賈睿
• 申請（專利權）人: 常熟理工學院
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 楊曉玲

本發明公開了一種基于Au@Ag核殼結構比色檢測卡那霉素的方法，包括以下步驟：(1)設計與合成核酸適配體片段；(2)制備Au@Ag核殼結構納米粒子；(3)取離心管，將濃度為10nM～50nM的核酸適配體和濃度為10nM～50nM的NaCl加入到1500μL的PBS緩沖液中，再加入待測樣品，混合并在室溫下穩定20min，然后向離心管中加入500μL的納米溶液，掃描其紫外可見吸收光譜；(4)根據線性方程確定卡那霉素濃度，線性方程為：y＝0.00011x+0.39901；本發明的方法可實現食品中卡那霉素的簡易迅速、高靈敏的檢測，能夠滿足實際樣品對卡那霉素的檢測需求。

技術領域

本發明涉及一種檢測卡那霉素的方法，具體是一種基于Au@Ag核殼結構比色檢測卡那霉素的方法，屬于食品安全技術領域。

背景技術

卡那霉素作為一種廣譜抗菌素，屬于氨基糖苷類，可以與核糖體結合，達到抑制蛋白質生物合成的作用，因其效果顯著，價格低廉，在我國是一種應用廣泛的獸藥。但是氨基糖苷類抗生素具有較強的副作用和毒性，長期接觸容易引起聽力減退，腎臟損害，甚至能透過胎盤屏障而使胎兒受損等。卡那霉素可在動物源食物中殘留，通過食物鏈富集作用傳給人類，危害人類的身體健康。隨著人們生活質量水平的提高，對食品安全的要求也越來越嚴格，而且我國也規定了其在畜產品中的最高殘留量，故它的檢測限問題也越來越受到人們的重視，成為研究的熱點。

目前，卡那霉素的檢測方法分為微生物法、高效液相色譜法、分光光度法、電化學法等。上述方法雖然結果較為準確，但微生物法操作復雜，耗時，特異性、靈敏度欠佳，高效液相色譜法需要大型儀器設備，花費高，所以一般都很難用于現場快速檢測，基于此亟需開發一種新型的檢測方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于Au@Ag核殼結構比色檢測卡那霉素的方法，可實現食品(不限于食品)中卡那霉素的簡易迅速、高靈敏的檢測。

為了達到上述技術目的，本發明的技術方案是：

一種基于Au@Ag核殼結構比色檢測卡那霉素的方法，包括以下步驟：

(1)設計與合成核酸適配體片段；

設計一段能夠對卡那霉素具有特異性親和力而結合的DNA片段，通過DNA合成儀制備序列，DNA：5’-AGA TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA-3’

(2)制備Au@Ag核殼結構納米粒子，所述Au@Ag核殼結構納米粒子的制備方法：

1)以檸檬酸三鈉還原硝酸銀獲得金納米粒子，所述金納米粒子的粒徑為25nm，最大吸收峰在523nm。

2)將制備好的金納米粒子濃縮10倍冷卻至室溫，4℃保存待用。

3)將500μL0.1M磷酸緩沖液和100μL1％聚乙烯吡咯烷酮溶液和50μL0.1M抗壞血酸混合，加入濃縮的納米金，再加入1mM的硝酸銀溶液，混合均勻，得到Au@Ag核殼結構納米粒子。

(3)取離心管，將濃度為10nM～50nM的核酸適配體和濃度為10nM～50nM的NaCl加入到1500μL的PBS緩沖液中，再加入待測樣品，混合并在室溫下穩定20min，然后向離心管中加入500μL的納米溶液，掃描其紫外可見吸收光譜。

鑒于核酸適配體的量和NaCl會直接影響到檢測的結果，為選擇最優化的量，取6個2mL離心管，均加入1500μL磷酸緩沖液(0.2M PBS,pH 7.4)，在每個試管中加入NaCl，使其最終濃度分別為0，10，20，30，40和50nM，然后向其中加入500μL的納米溶液。根據紫外可見光圖譜顯示，當NaCl的濃度為30nM時，吸收值最小，則納米粒子團聚程度最大，可知NaCl的最優濃度為30nM。