[發明專利]曲霉菌株及利用曲霉菌株發酵生產人乳鐵蛋白的方法

有效

• 申請號: 201810858429.2
• 申請日: 2018-07-31
• 公開（公告）號: CN108893415B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 馬承國;孫新中;肖建輝;王磊;張勇
• 申請（專利權）人: 上海凱圣生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P21/02;C12R1/665
• 代理公司: 上海海鈞知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31330
• 代理人: 陳劍

本發明公開了一種曲霉菌株及利用曲霉菌株發酵生產人乳鐵蛋白的方法。所述曲霉菌株為泡盛曲霉菌株(Aspergillus sp)KS?11?08，所述菌株保藏編號為CGMCC No：15674。所述方法包括：將所述菌株進行培養，得到種子液；將所述種子液進行發酵；得到含有重組人乳鐵蛋白的發酵液。本發明提供的泡盛曲霉菌株KS?11?08把重組人乳鐵蛋白基因序列轉入曲霉菌株，并在曲霉菌中得到正常表達。在所述發酵過程中，添加誘導物的情況下，轉入的重組人乳鐵蛋白基因在誘導物的作用下得到高效表達，顯著提高了人乳鐵蛋白的發酵產量，培養方法簡單，原料來源豐富，且價格低廉，經濟效益高，微生物生長繁殖快，生長周期短，產量高，可進行大規模生產。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種曲霉菌株及利用曲霉菌株發酵生產人乳鐵蛋白的方法。

背景技術

人乳鐵蛋白具有廣泛復雜的生物學功能，其脫鐵形式是一種多功能的免疫調節物質，是人體非特異性黏膜免疫系統中重要的非抗體保護蛋白，在抗感染抗炎癥的第一線發揮作用；鐵飽和的形式則主要作為人體生物利用度最高的鐵源，用以調節機體鐵代謝。當前，國內外對人乳鐵蛋白理論及應用的研究都非常重視，開發應用前景十分廣闊,可產生巨大的社會和經濟效益。特別是其廣譜而獨特的抗微生物活性，已使之成為抗菌、抗病毒類新藥設計的重要候選物。由于自然狀態下人乳鐵蛋白含量稀少，且從人乳中純化成本極高，利用基因工程技術制備是實現產業化生產唯一的途徑。

近年來，國內外已有利用轉基因技術在動物乳腺中生產重組人乳鐵蛋白方法的報道，但目前人們還未完全掌握人乳鐵蛋白基因表達控制的規律、對導入的目的基因對宿主染色體和目的基因本身的影響以及整合的詳細機理。同時，轉基因動物的成功率低，目的蛋白的表達水平遠低于乳汁中總蛋白含量，且目的基因的分離、改造、載體構件、體細胞克隆等技術不夠成熟。另外，動物的自身機體保護系統會產生對外源性物質產生排斥反應，如產生蛋白質水解，糖基化形式與人類不同，對產品的安全性構成了極大的威脅。因此，如何利用基因技術安全高效的生產人乳鐵蛋白是一項亟待解決的技術問題。

發明內容

鑒于上述現有技術方法的缺陷，本發明提供了一種曲霉菌株，及利用曲霉菌株發酵實現的安全高效、適于高密度培養的人乳鐵蛋白的生產方法。

本發明一方面提供了一種曲霉菌株：泡盛曲霉菌株(Aspergillus sp) KS-11-08，所述菌株保藏編號為CGMCC No.15674；保藏日期為2018年5月 7日，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

本發明另一方面提供了一種利用曲霉菌株發酵生產人乳鐵蛋白的方法，包括：

將所述菌株進行培養，得到種子液；

將上述種子液進行發酵；

得到含有重組人乳鐵蛋白的發酵液。

在一種優選實施例中，所述曲霉菌株為泡盛曲霉菌株(Aspergillus sp) KS-11-08，所述菌株保藏編號為CGMCC No.15674；保藏日期為2018年5月 7日，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

在一種優選實施例中，所述曲霉菌株可以先接種于斜面培養基，培養得到成熟的菌種，然后將得到的菌種接種于液體種子培養基進行培養。

在一種優選實施例中，所述曲霉菌株接種于斜面培養基之后得到的一級菌種，所得一級菌種可以繼續接種于固體培養基培養，得到二級或三級菌種，所述一、二、三級菌種均可接種至液體種子液培養基進行培養。

優選地，所述斜面培養基包括碳水化合物、含氮物質、無機鹽、微量元素、維生素和水。