[發明專利]一種檢測TRECs和KRECs基因的實時熒光定量PCR試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810857790.3
• 申請日: 2018-07-31
• 公開（公告）號: CN108998511A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 朱智;李艷艷;歐恩智;陳珺
• 申請（專利權）人: 朱智;陳珺
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海滬慧律師事務所 31311
• 代理人: 朱九皋

1.一種用于檢測TRECs和KRECs基因的實時熒光定量PCR試劑盒，該試劑盒中包括：1)DNA提取試劑，2)包含TRECs基因、KRECs基因和TRAC基因插入序列的標準品，3)包含TRECs基因、TRAC基因的熒光PCR引物和檢測探針的熒光PCR反應液I，4)包含KRECs基因、TRAC基因的熒光PCR引物和檢測探針的熒光PCR反應液II。

2.如權利要求1所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述TRECs基因的熒光PCR引物包含TRECs熒光PCR正向引物和反向引物；所述TRAC基因的熒光PCR引物包含TRAC熒光PCR正向引物和反向引物；所述KRECs基因的熒光PCR引物包含KRECs熒光PCR正向引物和反向引物；所述檢測探針為TRECs檢測探針、TRAC檢測探針或KRECs檢測探針。

3.如權利要求2所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述熒光PCR反應液I是由TRECs熒光PCR正向引物、反向引物和TRECs檢測探針，TRAC熒光PCR正向引物、反向引物和TRAC檢測探針，2X real time Mix和無菌的超純水組成；所述TRECs熒光PCR正向引物和反向引物的含量分別為300-1000nM，優選為400nM；所述TRAC熒光PCR正向引物和反向引物的含量分別為300-1000nM，優選為400nM；所述TRECs檢測探針和TRAC檢測探針的含量分別為50-250nM，優選為100nM。

4.如權利要求3所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述TRECs熒光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，TRECs檢測探針的序列如SEQ ID NO.3所示；TRAC熒光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.8所示，TRAC檢測探針的序列如SEQ ID NO.9所示。

5.如權利要求2所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述熒光PCR反應液II是由KRECs熒光PCR正向引物、反向引物和KRECs檢測探針，TRAC熒光PCR正向引物、反向引物和TRAC檢測探針，2X realtime Mix和無菌的超純水組成；所述KRECs熒光PCR正向引物和反向引物的含量分別為300-1000nM，優選為400nM；所述TRAC熒光PCR正向引物和反向引物的含量分別為300-1000nM，優選為400nM；所述KRECs檢測探針、TRAC檢測探針含量分別為50-250nM，優選為100nM。

6.如權利要求5所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述KRECs熒光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.4所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.5所示，KRECs檢測探針的序列如SEQ ID NO.6所示；TRAC熒光PCR正向引物的序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.8所示，TRAC檢測探針的序列如SEQ ID NO.9所示。

7.如權利要求2所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，熒光PCR反應液I和熒光PCR反應液II中的所述TRECs檢測探針、KRECs檢測探針和TRAC檢測探針均為Taqman探針，標記Taqman探針5’端的為熒光發光基團，其是FAM、VIC、TET、JOE、ROX、CY3、CY5、HEX中的一種；標記3’端的為熒光淬滅基團，其是TAMRA、BHQ1中的一種。

8.如權利要求7所述的實時熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述TRECs檢測探針的5’端為HEX熒光基團，3’端為TAMRA熒光淬滅基團；所述KRECs檢測探針的5’端為HEX熒光基團，3’端為TAMRA熒光淬滅基團；所述TRAC檢測探針的5’端為FAM熒光基團，3’端為TAMRA熒光淬滅基團。