[發明專利]土壤脲酶的測定方法

在審

• 申請號: 201810857007.3
• 申請日: 2018-07-31
• 公開（公告）號: CN108956594A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 焦曉光;周珂;徐欣;張錦源;隋躍宇;陳一民;王曉軍
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210
• 代理人: 何強

土壤脲酶的測定方法，該方法涉及一種脲酶的測定方法。本發明解決目前比色法測定土壤脲酶活性的測定效果不穩定、準確率較低的問題。測定方法：一、獲得樣品測量液；二、無土對照樣、無基質對照樣制備；三、獲得初步NH₃?N濃度、無土對照樣NH₃?N濃度和無基質對照樣NH₃?N濃度；四、計算：以1g土壤中NH₃?N的質量表示脲酶活性：Ure＝a·V·n/m。本發明測定土壤脲酶活性平行性好，變異系數小，方法可行性高、精確度高。

技術領域

本發明涉及一種脲酶的測定方法。

背景技術

脲酶廣泛存在于土壤中，為含鎳寡聚酶，具有絕對專一性，特異性地催化脲素水解釋放出氨和二氧化碳。土壤脲酶活性，與土壤的微生物數量、有機物質含量、全氮和速效氮含量呈正相關。根際土壤脲酶活性高于非根際土壤脲酶活性，中性土壤脲酶活性大于堿性土壤，通常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素狀況。

測定脲酶的方法很多，包括比色法、擴散法、電極法等。其中苯酚-次氯酸鈉比色法最為常用，該方法以尿素為基質，根據酶促產物氨與苯酚-次氯酸鈉作用(在堿性溶液或在亞硝基鐵氰化鈉催化劑作用下)生成藍色的靛酚，顏色深淺與氨的量相關，因此可以測定氨量來表示脲酶的活性。但此方法存在許多不足，首先檸檬酸鹽緩沖液的配制較為復雜，且檸檬酸鹽緩沖液不夠穩定，影響測定效果；其次，使用檸檬酸鹽緩沖液時，土樣濾液顏色較深，且不夠澄清，影響吸光度測定，導致目前苯酚-次氯酸鈉比色法測定脲酶活性準確性較低。

發明內容

本發明的目的是為了解決目前比色法測定土壤脲酶活性的測定效果不穩定、準確率較低的問題，提供了一種土壤脲酶的測定方法

土壤脲酶的測定方法按以下步驟進行：

一、取4.95g～5.05g風干土樣品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用緩沖工作液搖勻，再在37℃±1℃恒溫箱中培養23h～25h，獲得樣品測量液；

二、無土對照樣、無基質對照樣制備：

取4.95g～5.05g水加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用緩沖工作液搖勻，再在37℃±1℃恒溫箱中培養23h～25h，即得到無土對照樣；

取4.95g～5.05g風干土樣品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL水和20mL±2μL修正通用緩沖工作液搖勻，再在37℃±1℃恒溫箱中培養23h～25h，即得到無基質對照樣；

三、過濾步驟一樣品測量液，取1mL±2μL濾液加蒸餾水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚鈉溶液和3mL±2μL次氯酸鈉溶液，邊加邊搖勻，20min～25min后顯色，定容，1h內分光光度計波長578nm比色，測定吸光值再與氮溶液濃度標準曲線比較，獲得初步NH₃-N濃度；過濾步驟二無土對照樣和無基質對照樣測量液，分別取1mL±2μL濾液加蒸餾水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚鈉溶液和3mL±2μL次氯酸鈉溶液，邊加邊搖勻，20min～25min后顯色，定容，1h內分光光度計波長578nm比色，測定吸光值再與氮溶液濃度標準曲線比較，獲得無土對照樣NH₃-N濃度和無基質對照樣NH₃-N濃度；四、計算

以1g土壤中NH₃-N的質量(mg)表示脲酶活性(Ure)：

Ure＝a·V·n/m