[發明專利]土壤脲酶的測定方法

在審

• 申請號: 201810857007.3
• 申請日: 2018-07-31
• 公開（公告）號: CN108956594A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 焦曉光;周珂;徐欣;張錦源;隋躍宇;陳一民;王曉軍
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210
• 代理人: 何強

1.土壤脲酶的測定方法，其特征在于該方法按以下步驟進行：

一、取4.95g～5.05g風干土樣品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用緩沖工作液搖勻，再在37℃±1℃恒溫箱中培養23h～25h，獲得樣品測量液；

二、無土對照樣、無基質對照樣制備：

取4.95g～5.05g水加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL尿素溶液和20mL±2μL修正通用緩沖工作液搖勻，再在37℃±1℃恒溫箱中培養23h～25h，即得到無土對照樣；

取4.95g～5.05g風干土樣品加1mL±2μL甲苯，15min后加10mL±2μL水和20mL±2μL修正通用緩沖工作液搖勻，再在37℃±1℃恒溫箱中培養23h～25h，即得到無基質對照樣；

三、過濾步驟一樣品測量液，取1mL±2μL濾液加蒸餾水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚鈉溶液和3mL±2μL次氯酸鈉溶液，邊加邊搖勻，20min～25min后顯色，定容，1h內分光光度計波長578nm比色，測定吸光值再與氮溶液濃度標準曲線比較，獲得初步NH₃-N濃度；過濾步驟二無土對照樣和無基質對照樣測量液，分別取1mL±2μL濾液加蒸餾水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚鈉溶液和3mL±2μL次氯酸鈉溶液，邊加邊搖勻，20min～25min后顯色，定容，1h內分光光度計波長578nm比色，測定吸光值再與氮溶液濃度標準曲線比較，獲得無土對照樣NH₃-N濃度和無基質對照樣NH₃-N濃度；四、計算

以1g土壤中NH₃-N的質量表示脲酶活性：

Ure＝a·V·n/m

其中：a為樣品測量液NH₃-N濃度，樣品測量液NH₃-N濃度＝初步NH₃-N濃度-無土對照樣NH₃-N濃度-無基質對照樣NH₃-N濃度；V為顯色液體積；n為樣品測量液的分取倍數；m為烘干土重；

其中，尿素溶液為24g～26g尿素溶于水中，并用蒸餾水定容至250mL制成；

修正通用緩沖工作液是199～201mL修正通用緩沖儲備液用0.1M HCl調節至pH6.0，然后用蒸餾水定容到1L制成；

上述修正通用緩沖儲備液是將12.0g～12.2g Tris、11.5g～11.7g順丁烯二酸、13.9g～14.1g檸檬酸一水化合物和6.2g～6.4g硼酸溶于490mL～510mL 1M NaOH中，再用蒸餾水定容到1000mL制成。

2.根據權利要求1所述的土壤脲酶的測定方法，其特征在于步驟三中氮溶液濃度標準曲線按以下步驟繪制分別取0mL、1mL、3mL、5mL、7mL、9mL、11mL和13mL氮工作液加蒸餾水至20mL，然后加入4mL±2μL苯酚鈉溶液和3mL±2μL次氯酸鈉溶液，邊加邊搖勻，20min～25min后顯色，定容，1h內分光光度計波長578nm比色，繪制氮溶液濃度標準曲線。

3.根據權利要求1或2所述的土壤脲酶的測定方法，其特征在于步驟三中定容至50mL。

4.根據權利要求1所述的土壤脲酶的測定方法，其特征在于步驟三中苯酚鈉溶液按以下步驟配制：稱62g～63g苯酚溶于乙醇中，再加1.8mL～2.2mL甲醇和18.3mL～18.7mL丙酮，然后用乙醇稀釋至100mL，即得到A液；稱26g～28g氫氧化鈉用水定容到100mL，即得到B液；取A液、B液各20mL±2μL混合，再用蒸餾水定容至100mL，即得到苯酚鈉溶液。

A液、B液使用前保存在冰箱中，使用時進行混合。