[發明專利]一種群體感應淬滅酶ZD03-aiiA基因、其編碼蛋白質及其克隆方法在審
| 申請號： | 201810851604.5 | 申請日： | 2018-07-30 |
| 公開（公告）號： | CN109022378A | 公開（公告）日： | 2018-12-18 |
| 發明（設計）人： | 丁賢;殷波;張盼 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院南海水產研究所 |
| 主分類號： | C12N9/00 | 分類號： | C12N9/00;C12N15/52;C12N15/10 |
| 代理公司： | 廣州專理知識產權代理事務所(普通合伙) 44493 | 代理人： | 譚昉 |
| 地址： | 510300 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 群體感應 基因 編碼蛋白質 淬滅 克隆 分子生物學技術 群體感應系統 微生物資源 研究和應用 蛋白功能 療法提供 生態環境 抑制細菌 靶點 菌株 病菌 微生物 養殖 分析 開發 研究 | ||
1.一種群體感應淬滅酶ZD03-aiiA基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.權利要求1所述的群體感應淬滅酶ZD03-aiiA基因編碼的蛋白質，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO:2。
3.權利要求1所述的群體感應淬滅酶ZD03-aiiA基因的克隆方法，其特征在于，包括以下步驟：
ZD03-AiiA基因的簡并引物設計，其簡并引物對為，
aiiF：SEQ ID NO:3 5′-ATG GGA TCC ATG ACA GTA AAG AAG CTT TAT-3′；
aiiR：SEQ ID NO:4 5′-GTC GAA TTC CTC AAC AAG ATA CTC CTA ATG-3′；
ZD03菌株總DNA提取，12000 r/min離心1 min收集對數生長期菌體，然后加裂解液，再加入5 mol/L NaCl混勻,12000 r/min離心10 min， 吸取上清液補加等體積的苯酚/氯仿/異戊醇(體積比為25:24:1)抽提兩次,12,000 r/min離心10 min，吸取上清液,加2.5倍體積預冷的無水乙醇混勻,置-20°C冰箱5 min，12000 r/min離心15 min,棄上清液，用70 %乙醇洗滌沉淀，離心將殘留液體甩到管底,用移液器吸干凈,再自然晾干,用225μL ddH2O或TEBuffer溶解沉淀, 4°C保存備用，以aiiF和aiiR為引物，ZD03菌株總DNA為模板，進行PCR擴增，擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，得到ZD03-aiiA基因。
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