[發明專利]一種酚氧化酶活性蛋白的制備方法有效
| 申請號： | 201810845552.0 | 申請日： | 2018-07-27 |
| 公開（公告）號： | CN108998427B | 公開（公告）日： | 2021-07-06 |
| 發明（設計）人： | 康信煌;鄧春梅;洪鵬志;何蘭珍;張國光 | 申請（專利權）人： | 廣東海洋大學 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02 |
| 代理公司： | 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228 | 代理人： | 李慧 |
| 地址： | 524000 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 氧化酶 活性 蛋白 制備 方法 | ||
1.一種酚氧化酶活性蛋白的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）取鱟血漿置于10℃的水浴中，滴加入100%的飽和硫酸銨溶液，邊加邊攪拌，滴加完后，置于冰箱4℃冷藏室中靜置1小時；
（2）靜置1小時后取出，用高速冷凍離心機，在4℃、10000-12000r/min條件下，離心25-35min，得鱟血漿血藍蛋白，4℃保存，備用；
（3）取步驟（2）制得的鱟血漿血藍蛋白溶于0.01mol/L、pH=7的PBS緩沖液，裝入MW3500Da透析袋中，透析過夜，收集得血藍蛋白溶液，4℃保存，備用；
（4）將步驟（3）收集的血藍蛋白溶液過SephacrylS-100丙烯葡聚糖凝膠柱純化，用50mmol/L、pH=7.0的Tris-HCl洗脫，收集在280nm處有吸收的溶液，得到血藍蛋白溶液為酚氧化酶活性蛋白；
（5）在步驟（4）獲得的酚氧化酶活性蛋白中加入10uL的十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液進行激活，激活條件為：pH6.2，操作溫度37℃；
步驟（1）所述鱟血漿與100%的飽和硫酸銨溶液的物料比是0.6-0.7:1；
步驟（5）所述十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液濃度為30mmol/L。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述取鱟血漿與100%的飽和硫酸銨溶液的物料比是0.68:1。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）所述高速冷凍離心機在11000r/min條件下，離心30min。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）所述鱟血漿血藍蛋白溶于PBS緩沖液時，蛋白濃度為10 mg/mL。
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