[發明專利]基于iTRAQ技術的胎膜早破孕婦陰道分泌物差異蛋白的篩選方法

在審

• 申請號: 201810844897.4
• 申請日: 2018-07-27
• 公開（公告）號: CN109142565A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 王建東
• 申請（專利權）人: 重慶早柒天生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于醫療保健技術領域，具體提供了一種基于iTRAQ技術的胎膜早破孕婦陰道分泌物差異蛋白的篩選方法。該篩選方法通過結合iTRAQ技術和2DLC?MS/MS技術，實現了胎膜早破孕婦陰道分泌物差異蛋白的快速高關聯度全面篩選，并經過進一步的鑒定分析，所篩選出的差異蛋白IGFBP?1、AFP、PRL和LZM可作為胎膜早破診斷的生物標志物，具有較高的靈敏度和特異性。

技術領域

本發明屬于醫療保健技術領域，具體涉及一種基于iTRAQ技術的胎膜早破孕婦陰道分泌物差異蛋白的篩選方法。基于此篩選方法，本發明還提供了通過該篩選方法獲得的胎膜早破孕婦陰道分泌物差異蛋白，并進一步提供了所述差異蛋白作為生物標志物在制備診斷胎膜的產品中的應用。

背景技術

胎膜早破是指臨產前胎膜破裂，是常見的產科并發癥，發生率為2.7％-7％[謝幸,茍文麗.婦產科學.第8版[M].人民衛生出版社,2013:133-135.]。胎膜早破可對孕婦及胎兒造成嚴重不良后果[ACOG Practice Bulletin No.188:Prelabor Rupture of Membranes[J].Obstetrics&Gynecology,2018,131(1):e1.]。胎膜早破導致的圍產兒死亡率高達2.5-11％，是圍產兒發病和死亡的重要原因，及時準確的診斷胎膜早破對孕婦及胎兒的預后有著極其重要的影響。目前臨床的診斷方法很多，但診斷的靈敏度及特異度有限，導致部分患者有漏診及誤診可能。若得不到及時診斷及治療，將會導致感染，胎盤早剝，早產，羊水過少，臍帶脫垂，胎兒窘迫、胎肺發育不良以及胎兒受壓綜合征等嚴重的臨床后果。

蛋白質組學技術的發展為我們尋找特異的標志物成為可能。很多學者已經用各種蛋白質組學技術[Michel P E,Crettaz D,Morier P,et al.Proteome analysis of humanplasma and amniotic fluid by Off‐Gel^TM isoelectric focusing followed by nano‐LC‐MS/MS[J].Electrophoresis,2006,27(5‐6):1169-1181..]、[Rüetschi U,RosénKarlsson G,et al.Proteomic analysis using protein chips to detect biomarkersin cervical and amniotic fluid in women with intra-amniotic inflammation[J].Journal of proteome research,2005,4(6):2236-2242.e]、[Thadikkaran L,CrettazD,Siegenthaler M A,et al.The role of proteomics in the assessment ofpremature rupture of fetal membranes[J].Clinica Chimica Acta,2005,360(1-2):27-36.]尋找胎膜早破特異的生物標志物。但是目前披露的篩選胎膜早破生物標志物的方式方法都存在一些缺陷，導致無法獲得靈敏度高、特異性好的生物標志物。

iTRAQ技術以其可以同時對多個樣本進行檢測、定量靈敏、反應速度快、標記率高、重復率較高，使其得到大量的應用。本發明期望借助iTRAQ技術和2DLC-MS/MS技術實現高靈敏度、較好特異性的胎膜早破生物標志物的篩選。

發明內容

為了解決現有技術存在的上述問題，本發明的首要目的在于提供一種基于iTRAQ技術的胎膜早破孕婦陰道分泌物差異蛋白的篩選方法，以期通過該篩選方法獲得高靈敏度、較好特異性的胎膜早破生物標志物。

基于前述首要目的，本發明首先提供基于iTRAQ技術的胎膜早破孕婦陰道分泌物差異蛋白的篩選方法，包括以下步驟：

S1、制定BSA標準品的標準曲線，并采用Bradford法測定樣品蛋白質濃度；