[發明專利]一種乳酸乳球菌抗菌肽、其制備方法及應用

在審

• 申請號: 201810839942.7
• 申請日: 2018-07-27
• 公開（公告）號: CN108948160A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 劉陳立;蒙海林;劉復榮;范錦戴;劉明珠;何敬愉;崔金明
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院;廣州中國科學院先進技術研究所
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;C12N15/63;A61K38/16;A61P31/04;A23K20/147;A23L3/3526
• 代理公司: 廣州容大專利代理事務所(普通合伙) 44326
• 代理人: 劉新年

本發明涉及基因工程技術領域，尤其涉及一種乳酸乳球菌抗菌肽、其制備方法及應用。本發明的乳酸乳球菌抗菌肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明的抗菌肽lactocin C1?8，具有高效廣譜抑菌作用，具有較強的抑制耐藥菌的能力，尤其針對金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌具有明顯的抑制作用；熱穩定性高，耐酸耐堿，毒性低，可作為抗生素替代品使用。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其涉及一種乳酸乳球菌抗菌肽、其制備方法及應用。

背景技術

抗菌肽是生物先天免疫的重要效應分子，廣泛存在于動物、植物、微生物中，屬于對抗外源病原體的多肽類物質。迄今為止，已有數千種抗菌肽被分離鑒定出來，且陸續有新的天然抗菌肽被發現，大致可以分為四類：殺菌肽類、防御素類、蛙皮素和植物抗菌肽。不同抗菌肽的分子量、抑菌譜、遺傳起源與生化特性、作用方式等都不相同，且不同抗菌肽產生菌都表現出了其獨特的免疫機制。大多數抗菌肽由真核生物產生，在殺滅病原微生物的同時，不可避免地亦會殺滅益生菌，從而打破微生態平衡。乳酸菌作為一類廣泛存在于環境、人類和動物腸道中的菌群，絕大多數對維持生命健康具有重要的生理作用，其產生的乳酸、抗菌肽等抑菌類物質對抑制腸道有害菌的生長和定植起著極其關鍵的作用，從而維持腸道正常的微生態平衡，且不會危害到益生菌的生長。

抗生素的使用引發了一系列問題，如由于抗生素難降解，使環境遭到嚴重破壞與污染，且已誘發多種抗性基因的產生，人類的身體健康受到嚴重的威脅。抗菌肽作為一種安全環保的抗生素替代品，在醫藥行業、飼料和食品添加劑等領域都具有廣泛的應用前景。

目前已報道的抗菌肽中，有幾種來源于乳酸乳球菌的抗菌肽類物質已被證實具有高效的抑菌活性和良好的開發潛力，其中部分乳酸乳球菌天然存在于動物的消化道中。

最早被發現的乳酸菌肽是一種由乳酸乳球菌亞種產生的肽，命名為nisin，于1969年被FAO/WHO認證許可用于食品的防腐中，是目前世界上唯一在多數國家得到授權并允許應用于食品領域的抗菌肽。nisin可有效抑制多數革蘭氏陽性致病菌的生長，具有較強的熱穩定性和pH穩定性，在酸性及中性條件下表現出良好的抑菌活性，但在堿性條件下基本失去活性，無法保持理想的抑菌作用，因而獲得一種可耐酸耐堿的抗菌肽，可拓寬其應用范圍及保持良好的應用效果。鑒于乳酸乳球菌普遍會產生nisin，且少數可產生其他廣譜或耐酸堿抗菌肽，為進一步開發利用源于乳酸菌的抗菌肽，找到更多的抗菌肽進行研究，從而為后期的實際應用奠定基礎。

發明內容

鑒于此，有必要針對上述問題提供一種新型乳酸菌抗菌肽、其制備方法及應用，所述抗菌肽具有較強的抑制耐藥性金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌的活性，且具有較強的熱穩定性及耐酸堿特性。

本發明是通過以下技術方案實現的：

第一方面，本發明提供一種抗菌肽，所述抗菌肽命名為lactocin C1-8；所述抗菌肽氨基酸序列如下SEQ ID NO.1所示。

優選地，所述抗菌肽核苷酸序列如下SEQ ID NO.2所示。

優選地，所述抗菌肽氨基酸序列的分子量為3475Da。

所述抗菌肽具有較強的熱穩定性，于121℃條件下處理15min后仍保持原有活性的90％以上。

所述抗菌肽具有耐酸耐堿活性，于pH2.0或pH10.0條件下孵育2h后，仍保持原有活性的80％以上。

優選地，所述抗菌肽來自于斑仔魚腸道菌群。

第二方面，本發明提供一種表達載體，所表述載體含有至少一個拷貝的如第一方面所述的核苷酸序列。

第三方面，本發明提供一種重組的宿主細胞，所述重組的細胞含有如第二方面所述的表達載體。