[發明專利]一種乳酸乳球菌抗菌肽、其制備方法及應用在審
| 申請號： | 201810839942.7 | 申請日： | 2018-07-27 |
| 公開（公告）號： | CN108948160A | 公開（公告）日： | 2018-12-07 |
| 發明（設計）人： | 劉陳立;蒙海林;劉復榮;范錦戴;劉明珠;何敬愉;崔金明 | 申請（專利權）人： | 深圳先進技術研究院;廣州中國科學院先進技術研究所 |
| 主分類號： | C07K14/195 | 分類號： | C07K14/195;C12N15/31;C12N15/63;A61K38/16;A61P31/04;A23K20/147;A23L3/3526 |
| 代理公司： | 廣州容大專利代理事務所(普通合伙) 44326 | 代理人： | 劉新年 |
| 地址： | 518055 廣東省深圳市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 抗菌肽 乳酸乳球菌 制備 金黃色葡萄球菌 基因工程技術 抗生素替代品 蠟樣芽孢桿菌 氨基酸序列 核苷酸序列 廣譜抑菌 耐酸耐堿 熱穩定性 耐藥菌 應用 | ||
1.一種乳酸乳球菌抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
3.根據權利要求1所述的抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列的分子量為3475Da。
4.根據權利要求1-3任意一項所述的抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽來自于斑仔魚回腸菌群。
5.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體含有至少一個拷貝的權利要求2所述的核苷酸序列。
6.一種重組的宿主細胞，其特征在于，所述重組的宿主細胞含有權利要求5所述的表達載體。
7.一種如權利要求1-3中任一項所述的抗菌肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)提取菌群宏基因組；
(2)根據抗菌肽nisin基因設計引物，以提取的菌群宏基因組為模板進行PCR擴增；
(3)將PCR產物純化，并將該目的產物和載體分別進行NcoⅠ和HindⅢ雙酶切，驗證酶切成功后進行純化；
(4)將酶切產物與質粒載體進行連接，構建分泌表達抗菌肽的重組質粒，導入宿主細胞，得到表達抗菌肽的表達工程菌；
(5)用(4)中的工程菌，表達制得權利要求1-3任意一項所述的抗菌肽。
8.一種如權利要求1-4中任一項所述的抗菌肽、如權利要求5所述的表達載體、如權利要求6所述的重組宿主細胞在制備動物飼料中的應用。
9.一種如權利要求1-4中任一項所述的抗菌肽、如權利要求5所述的表達載體、如權利要求6所述的重組宿主細胞在制備治療藥物中的應用。
10.一種如權利要求1-4中任一項所述的抗菌肽、如權利要求5所述的表達載體、如權利要求6所述的重組宿主細胞在食品加工及保藏中的應用。
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