[發明專利]一種檢測細菌AmpC基因的引物組、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201810831952.6
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN108559786A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 唐夢君;高玉時;周生;張小燕;周倩;張靜;唐修君;蒲俊華;陸俊賢;劉茵茵
• 申請（專利權）人: 江蘇省家禽科學研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 劉桐亞

本發明涉及微生物檢測領域，具體而言，涉及一種檢測細菌AmpC基因的引物組、試劑盒及檢測方法。所述引物組至少包含兩種AmpC基因ACC,FOX,MOX,CIT,DHA和EBC的引物，結合多重PCR技術，解決現有技術中AmpC基因型檢測不足的問題，檢測范圍廣、特異性高，能簡便、快速檢測細菌AmpC基因。

技術領域

本發明涉及病原微生物檢測領域，具體而言，涉及一種檢測細菌AmpC基因的引物組、試劑盒及檢測方法。

背景技術

AmpC酶存在于大多數革蘭氏陰性桿菌中，是導致革蘭氏陰性桿菌對廣譜β-內酰胺類抗生素耐藥的主要機制。按傳播的介導方式可以分為質粒介導傳播和染色體介導傳播兩種。質粒介導AmpC酶危害嚴重，這是因為一種質?？赏瑫r攜帶多個耐藥基因，使得產AmpC酶的菌株表現出多重耐藥性，而且耐藥譜呈現擴大趨勢。另一方面，質粒的可傳遞性，不僅可發生在同菌種之間，還可以發生在不同菌種之間，從而導致耐藥菌株更為廣泛傳播，嚴重了阻礙了臨床治療。

從1989年Bauerfeind等報道質粒介導AmpC酶(CMY-1)以來，很多質粒AmpC酶在世界各地陸續被報道，目前已發現的多達兩百多種。對報道的質粒AmpC基因進行DNA序列分析，并與某些種屬的染色體AmpC基因進行同源性比較，可將質粒介導AmpC基因分為6個群：ACC,FOX,MOX,DHA,CIT和EBC。

至今，美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)還沒有推薦檢測AmpC酶的標準方法，如何快速、準確的檢測質粒介導AmpC酶是臨床實驗室面臨的一個普遍難題。Perez-Perez等根據AmpC基因的同源性，針對6群設計了6組特異性引物，多重PCR幾乎能擴增出所有的質粒AmpC基因，并通過測序確定基因型和發現新基因型。該多重PCR方法隨后被很多研究采納，近乎作為一種“金標準”被廣泛用于質粒AmpC基因型別的檢測。但該方法只覆蓋了當時發現的29種基因型，對于后來新發現的眾多基因型，該方法則無法檢出。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種檢測細菌AmpC基因的引物組，所述引物組至少包含兩種AmpC基因ACC,FOX,MOX,CIT,DHA和EBC的引物，結合多重PCR技術，解決現有技術中AmpC基因型檢測不足的問題，檢測范圍廣、特異性高，能簡便、快速檢測細菌AmpC基因。

本發明的第二目的在于提供一種檢測細菌AmpC基因的試劑盒，其包括如上所述的引物組和輔助檢測試劑，具有包裝良好、使用方便的優點。

本發明的第三目的在于提供一種非診斷目的的細菌AmpC基因的檢測方法，其使用所述引物組或試劑盒對待檢測細菌樣本的總DNA或質粒DNA進行擴增，通過檢測擴增產物中AmpC基因是否存在以確定所述檢測細菌樣本的AmpC酶，能夠對細菌中的多種AmpC基因同時進行檢測，該方法檢測范圍廣、特異性好、靈敏度高，適合大規模樣本檢測中推廣應用。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種檢測細菌AmpC基因的引物組，所述引物組選自下列引物對中的至少兩種；

一種檢測細菌AmpC基因的試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物組和輔助檢測試劑。

利用上述的引物組或試劑盒進行非診斷目的的細菌AmpC基因檢測的方法，包括：使用所述引物組或試劑盒對待檢測細菌樣本的總DNA或質粒DNA進行擴增，通過檢測擴增產物中AmpC基因是否存在以確定所述檢測細菌樣本的AmpC酶。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：