[發明專利]一種檢測細菌AmpC基因的引物組、試劑盒及檢測方法在審
| 申請號： | 201810831952.6 | 申請日： | 2018-07-26 |
| 公開（公告）號： | CN108559786A | 公開（公告）日： | 2018-09-21 |
| 發明（設計）人： | 唐夢君;高玉時;周生;張小燕;周倩;張靜;唐修君;蒲俊華;陸俊賢;劉茵茵 | 申請（專利權）人： | 江蘇省家禽科學研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 劉桐亞 |
| 地址： | 225000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物組 基因 細菌 試劑盒 種檢測 檢測 基因型檢測 微生物檢測 快速檢測 多重PCR 引物 | ||
1.一種檢測細菌AmpC基因的引物組，其特征在于，所述引物組選自下列引物對中的至少兩種；
2.一種檢測細菌AmpC基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物組和輔助檢測試劑。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述輔助檢測試劑包括PCR緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸混合物、DNA聚合酶、水、陽性對照、陰性對照和DNA分子量內標中的一種或多種。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR緩沖液的主要成分包括Tris-HCl、KCl和MgCl2的一種或多種。
5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶選自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4DNA聚合酶、Klenow片段。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶為Taq DNA聚合酶。
7.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含有所述基因CIT、ACC、FOX、MOX、DHA和EBC全長的一種或多種的pUC57質粒。
8.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為超純水。
9.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括DNA提取試劑、核酸純化試劑的一種或兩種。
10.利用權利要求1所述的引物組或權利要求2～9任一項所述的試劑盒進行非診斷目的的細菌AmpC基因檢測的方法，其特征在于，包括：
使用所述引物組或試劑盒對待檢測細菌樣本的總DNA或質粒DNA進行擴增，通過檢測擴增產物中AmpC基因是否存在以確定所述檢測細菌樣本的AmpC基因；
優選地，在進行所述擴增時，擴增體系中所述基因DHA和EBC的各引物濃度為0.15～0.25mmol/L；更優選為0.20mmol/L；
所述耐藥基因CIT、ACC、FOX和MOX的各引物濃度為0.35～0.45mmol/L；更優選為0.40mmol/L；
優選地，在進行所述擴增時，退火溫度為60～69℃；更優選為65℃；
優選地，所述總DNA或質粒DNA的提取方法包括水煮法、機械法、溶解酶法、玻璃珠法或SDS苯酚法的一種。
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