[發明專利]用于進行薔薇科植物物種鑒定的片段組合、特異引物及其應用

有效

• 申請號: 201810825139.8
• 申請日: 2018-07-25
• 公開（公告）號: CN110760510B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 周世良;楊雪瑩;陳荀;張穩
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;秦夢楠

1.引物組合，由引物對1至引物對8組成；

所述引物對1由引物Ros-matK-F和引物Ros-matK-R組成；

所述引物Ros-matK-F為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-matK-R為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

所述引物對2由引物Ros-ITS-1-F和引物Ros-ITS-1-R組成；

所述引物Ros-ITS-1-F為序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-ITS-1-R為序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

所述引物對3由引物Ros-ITS-2-F和引物Ros-ITS-2-R組成；

所述引物Ros-ITS-2-F為序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-ITS-2-R為序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；

所述引物對4由引物Ros-rbcL-F和引物Ros-rbcL-R組成；

所述引物Ros-rbcL-F為序列表的序列7所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-rbcL-R為序列表的序列8所示的單鏈DNA分子；

所述引物對5由引物Ros-trnH-psbA-F和引物Ros-trnH-psbA-R組成；

所述引物Ros-trnH-psbA-F為序列表的序列9所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-trnH-psbA-R為序列表的序列10所示的單鏈DNA分子；

所述引物對6由引物Ros-atpB-rbcL-F和引物Ros-atpB-rbcL-R組成；

所述引物Ros-atpB-rbcL-F為序列表的序列11所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-atpB-rbcL-R為序列表的序列12所示的單鏈DNA分子；

所述引物對7由引物Ros-trnL-F和引物Ros-trnL-R組成；

所述引物Ros-trnL-F為序列表的序列13所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-trnL-R為序列表的序列14所示的單鏈DNA分子；

所述引物對8由引物Ros-sbeI-F和引物Ros-sbeI-R組成；

所述引物Ros-sbeI-F為序列表的序列15所示的單鏈DNA分子；

所述引物Ros-sbeI-R為序列表的序列16所示的單鏈DNA分子。

2.權利要求1所述的引物組合在輔助進行薔薇科植物物種鑒定中的應用。

3.含有權利要求1所述引物組合的試劑盒；所述試劑盒的用途為輔助進行薔薇科植物物種鑒定。

4.權利要求3所述試劑盒的制備方法，包括將各條引物單獨包裝的步驟。

5.一種薔薇科植物物種鑒定的方法，包括如下步驟：

以待測植物基因組DNA為模板，分別采用權利要求1所述的引物組合中的引物對進行如下步驟：PCR擴增、測序、系統發育樹構建和分析。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于：

所述系統發育樹構建和分析的方法為：將待測植物得到的測序序列經過序列校對、拼接和比對后，與相應基因位點的薔薇科數據合并，使用PAUP*4.0的Neighbor-joining算法進行系統發育樹構建，通過進行1000次重復的自展分析獲得各節點支持率來評估拓撲結構的可靠性。