[發明專利]用于進行薔薇科植物物種鑒定的片段組合、特異引物及其應用

有效

• 申請號: 201810825139.8
• 申請日: 2018-07-25
• 公開（公告）號: CN110760510B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 周世良;楊雪瑩;陳荀;張穩
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;秦夢楠

本發明公開了一種用于進行薔薇科植物物種鑒定的片段組合、特異引物及其應用。本發明提供的引物組合由序列表的序列1?序列16所示的單鏈DNA組成。利用本發明提供的特異引物，可開發鑒定薔薇科植物物種的通用試劑盒，推動植物DNA條形碼在社會服務中的應用。

技術領域

本發明涉及一種用于進行薔薇科植物物種鑒定的片段組合、特異引物及其應用。

背景技術

薔薇科是經濟意義非常重要的被子植物，大量的水果(如蘋果、梨、山楂、草莓、桃、李、梅、杏、櫻桃等)和觀賞植物(如梅花、桃花、櫻花、月季、玫瑰、花楸等)屬于該科。在北半球的亞熱帶和溫帶地區，薔薇科是大科之一，全世界約2800-3500種，在我國有約950種，一半以上為我國特有。仿冒、張冠李戴等問題，會帶來一些經濟的糾紛，例如我們市場上的櫻桃，實際上是兩個不同的物種：櫻桃(Prunus pseudocerasus)、歐洲甜櫻桃(C.avium)，而市面上售價較貴的“車厘子”實際上是指歐洲甜櫻桃，一些商販將櫻桃冒充“車厘子”出售，獲取高價利潤；花卉市場中販賣的所謂的“玫瑰”實際上為月季(Rosa chinensis)而并不是玫瑰(R.rugosa)。而解決這些問題的根本在于對薔薇科植物進行有效的鑒定。

傳統的形態學鑒定方法需要基于完整的形態特征，同時需要鑒定人員具有扎實的分類學基礎以及豐富的鑒定經驗進行鑒定，一旦待鑒定植物形態特征不完整(如碎片、加工過的果實等)則很難鑒定準確。除此之外，植物形態受生長環境影響極大，許多生長在不同生態環境中的同種植物，形態上會發生很大的變異，單純從形態進行鑒定也是存在一定的誤差。因此從DNA分子水平上對植物進行鑒定，是有效解決植物準確鑒定，保障市場公平競爭的迫切需要。

DNA條形碼技術(DNA barcoding)是指利用一段標準的、有足夠變異的、易擴增且相對較短的DNA序列片段作為標記來實現對物種的快速、準確和自動化鑒別技術。該技術彌補了傳統分類方法的不足，能夠快速、準確地鑒定物種。在2009年第三屆國際DNA條形碼會議上，決定將葉綠體基因片段rbcL和matK作為植物DNA標準條形碼的核心碼，同時建議將葉綠體基因片段trnH-psbA和核基因ITS作為植物DNA條形碼的補充碼。然而，上述的幾個條形碼并不能在所有類群中都有較高的分辨率，因此針對不同的類群，還會在此基礎上篩選類群專一的DNA條形碼片段。而針對薔薇科植物有效的鑒定方法還未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于進行薔薇科植物物種鑒定的片段組合、特異引物及其應用。

本發明提供了一種引物組合，為如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)由引物對1至引物對8組成；

(a2)引物對1至引物對8中的任意一個引物對；

(a3)引物對1至引物對8中的任意2個引物對的組合、任意3個引物對的組合、任意4個引物對的組合、任意5個引物對的組合、任意6個引物對的組合或任意7個引物對的組合；

(a1)或(a2)或(a3)中，所述引物對1由引物Ros-matK-F和引物Ros-matK-R組成；

所述引物Ros-matK-F為如下(b1)或(b2)：

(b1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(b2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物Ros-matK-R為如下(b3)或(b4)：

(b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(b4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物對2由引物Ros-ITS-1-F和引物Ros-ITS-1-R組成；