[發明專利]一種分離和純化外泌體的方法在審
| 申請號： | 201810824629.6 | 申請日： | 2018-07-25 |
| 公開（公告）號： | CN108865978A | 公開（公告）日： | 2018-11-23 |
| 發明（設計）人： | 李萍;趙卓;張紹峰;康偉;蘇加忱;李淑君;馬南;王紹成;呂志 | 申請（專利權）人： | 遼寧潤基生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 李穎 |
| 地址： | 110000 遼寧省沈陽市經濟*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 分離和純化 生物檢測技術 蛋白質分析 羥基磷灰石 電鏡分析 分離純化 粒徑分析 高純度 雜蛋白 懸液 應用 | ||
1.一種分離和純化外泌體的方法，其特征在于：從樣品中分離獲得含雜蛋白的外泌體懸液，利用羥基磷灰石分離純化獲得純外泌體。
2.按權利要求1所述的分離和純化外泌體的方法，其特征在于：將含雜蛋白的外泌體懸液加入裝有羥基磷灰石的純化柱中，混勻搖動孵育20-60min后，用含有磷酸二氫鈉的NaCl溶液洗滌1-3次；然后利用高濃度的磷酸二氫鈉溶液洗脫，得到的洗脫液即為純凈的的外泌體溶液。
3.按權利要求2所述的分離和純化外泌體的方法，其特征在于：所述洗滌液為含有磷酸二氫鈉的500mM NaCl溶液,其中磷酸二氫鈉濃度為10mM。
4.按權利要求2所述的分離和純化外泌體的方法，其特征在于：所述洗脫時高濃度的磷酸二氫鈉溶液濃度為10mM-200mM。
5.按權利要求2所述的分離和純化外泌體的方法，其特征在于：所述含雜蛋白的外泌體懸液與羥基磷灰石體積質量(ul/mg)比為5-7：1。
6.按權利要求1或2所述的分離和純化外泌體的方法，其特征在于：所述樣品為細胞培養液、人體外血清、血漿或尿液。
7.按權利要求1或2所述的分離和純化外泌體的方法，其特征在于：所述含雜蛋白的外泌體懸液從細胞培養液樣品中獲得時：細胞培養液在4℃，12000g離心15min，棄沉淀，留上清液過0.22μm濾膜，過濾后濾液經外泌體提取試劑沉淀，即得含雜蛋白的外泌體懸液；
從生物體液樣品中獲得時：尿液樣品在4℃，12000g離心15min，棄沉淀，留上清液過0.22μm濾膜，過濾后濾液經外泌體提取試劑沉淀，即得含雜蛋白的外泌體懸液；
從人體外血清、血漿樣品中獲得時，在4℃，3000g離心15min，棄沉淀，留上清液過0.22μm濾膜，過濾后濾液經外泌體提取試劑沉淀，即得含雜蛋白的外泌體懸液。
8.按權利要求7所述的分離和純化外泌體的方法，其特征在于：所述外泌體沉淀的重懸試劑為10mM的NaH2PO4。
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