[發明專利]一種EGFR基因突變位點的檢測方法及檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201810820350.0 | 申請日： | 2018-07-24 |
| 公開（公告）號： | CN108998524A | 公開（公告）日： | 2018-12-14 |
| 發明（設計）人： | 田軍龍;王文忠;胡軍;張為;陳蘇平;卜云璇 | 申請（專利權）人： | 為康（蘇州）基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369 | 代理人： | 韓飛 |
| 地址： | 215000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 突變位點 檢測試劑 檢測 單堿基延伸引物 非小細胞肺癌 多重PCR擴增 目標DNA序列 單堿基延伸 特異性引物 科研基礎 目標片段 質譜分析 樣本DNA 有效地 核酸 單管 擴增 個性化 測量 | ||
1.一種EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
提取樣本DNA；
設計用于擴增EGFR基因片段的特異性引物；
利用單管多重PCR擴增反應得到目標片段；
設計用于EGFR基因片段的單堿基延伸引物；
EGFR基因片段單堿基延伸；
核酸質譜分析測量目標DNA序列。
2.根據權利要求1所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：所述EGFR基因片段包括EGFR-1片段及EGFR-2片段。
3.根據權利要求2所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：所述用于擴增EGFR基因片段的特異性引物包括：
用于擴增EGFR-1片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：1或2，反向引物為SEQID Nos：3或4；
用于擴增EGFR-2片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：5或6，反向引物為SEQID Nos：7或8。
4.根據權利要求2所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：所述用于EGFR基因突變位點的片段的單堿基延伸引物包括：
用于EGFR-1片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：61；
用于EGFR-2片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：62。
5.根據權利要求1所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：所述利用單管多重PCR擴增反應包括以下步驟：Taq酶激活，DNA變性。
6.根據權利要求5所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：Taq酶激活時溫度為95℃。
7.根據權利要求5所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：Taq酶激活時間為15分鐘。
8.根據權利要求5所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：DNA變性時溫度為95℃。
9.根據權利要求5所述的EGFR基因突變位點的檢測方法，其特征在于：DNA變性時間為15秒。
10.一種EGFR基因突變位點的檢測試劑盒，其特征在于，包括：
用于擴增EGFR基因片段的特異性引物，特異性引物包括SEQ ID Nos：1或2、SEQ IDNos：3或4、SEQ ID Nos：5或6、SEQ ID Nos：7或8；
用于EGFR基因片段的單堿基延伸引物，單堿基延伸引物包括SEQ ID Nos：61、SEQ IDNos：62。
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