[發明專利]一種EGFR基因突變位點的檢測方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810820350.0
• 申請日: 2018-07-24
• 公開（公告）號: CN108998524A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 田軍龍;王文忠;胡軍;張為;陳蘇平;卜云璇
• 申請（專利權）人: 為康（蘇州）基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本發明公開了一種EGFR基因突變位點的檢測方法，包括以下步驟：提取樣本DNA；設計用于擴增EGFR基因突變位點的片段的特異性引物；利用單管多重PCR擴增反應得到目標片段；設計用于EGFR基因突變位點的片段的單堿基延伸引物；EGFR基因突變位點的片段單堿基延伸；核酸質譜分析測量目標DNA序列，能夠有效地對非小細胞肺癌患者展開EGFR基因突變位點的檢測，為此類患者開展個性化精準診治奠定臨床及科研基礎。本發明還涉及一種EGFR基因突變位點的檢測試劑盒。

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，尤其是涉及一種EGFR基因突變位點的檢測方法及檢測試劑盒。

背景技術

EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)是上皮生長因子(EGF) 細胞增殖和信號傳導的受體。EGFR也被稱作HER1、ErbB1，突變或過表達一般會引發腫瘤。EGFR是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，細胞膜貫通，分子量170KDa。EGFR基因突變檢測結果用于指導非小細胞肺癌(NSCLC)患者EGFR-TKIs治療已成為標準的臨床實踐，EGFR-TKIs已成為EGFR基因突變的晚期NSCLC患者的一線標準治療，三代TKI還可針對一、二代TKI用藥后因T790M突變出現而進展的二線及以后治療的患者。因缺乏精準的、高通量的基因突變篩查技術，進而阻礙了精準治療藥物的研發及臨床研究。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種EGFR基因突變位點的檢測方法和檢測試劑盒。

一種EGFR基因突變位點的檢測方法，包括以下步驟：提取樣本 DNA；設計用于擴增EGFR基因片段的特異性引物；利用單管多重PCR擴增反應得到目標片段；設計用于EGFR基因片段的單堿基延伸引物；EGFR基因片段單堿基延伸；核酸質譜分析測量目標DNA 序列。

進一步地，所述EGFR基因片段包括EGFR-1片段及EGFR-2片段。

進一步地，所述用于擴增EGFR基因片段的特異性引物包括：用于擴增EGFR-1片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：1或 2，反向引物為SEQ ID Nos：3或4；用于擴增EGFR-2片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：5或6，反向引物為SEQ ID Nos： 7或8。

進一步地，所述用于EGFR基因突變位點的片段的單堿基延伸引物包括：

用于EGFR-1片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：61；

用于EGFR-2片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：62。

進一步地，所述利用單管多重PCR擴增反應包括以下步驟：Taq 酶激活，DNA變性。

進一步地，Taq酶激活時溫度為95℃。

進一步地，Taq酶激活時間為15分鐘。

進一步地，DNA變性時溫度為95℃。

進一步地，DNA變性時間為15秒。

一種EGFR基因突變位點的檢測試劑盒，包括：用于擴增EGFR 基因片段的特異性引物，特異性引物包括SEQ ID Nos：1或2、SEQ ID Nos：3或4、SEQ ID Nos：5或6、SEQ ID Nos：7或8；用于EGFR 基因片段的單堿基延伸引物，單堿基延伸引物包括SEQ ID Nos：61、 SEQ IDNos：62。

相比現有技術，本發明通過設計特異性引物擴增EGFR基因片段，設計單堿基延伸引物使EGFR基因突片段的單堿基延伸，再通過核酸質譜分析測量目標DNA序列，能夠有效地對非小細胞肺癌患者展開EGFR基因突變篩查，為此類患者開展個性化精準診治奠定臨床及科研基礎。

附圖說明